Methods of nucleic acid amplification and sequencing

Details Methods of nucleic acid amplification and sequencing Methods of nucleic acid amplification and sequencing

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2344575

Methods for amplification and sequencing of at least one nucleic acid comprising the following steps: (1) forming at least one nucleic acid template comprising the nucleic acid(s) to be amplified or sequenced, wherein said nucleic acid(s) contains at the 5' end an oligonucleotide sequence Y and at the 3' end an oligonucleotide sequence Z and, in addition, the nucleic acid(s) carry at the 5' end a means for attaching the nucleic acid(s) to a solid support; (2) mixing said nucleic acid template(s) with one or more colony primers X, which can hybridize to the oligonucleotide sequence Z and carries at the 5' end a means for attaching the colony primers to a solid support, in the presence of a solid support so that the 5' ends of both the nucleic acid template and the colony primers bind to the solid support; (3) performing one or more nucleic acid amplification reactions on the bound template(s), so that nucleic acid colonies are generated and optionally, performing at least one step of sequence determination of one or more of the nucleic acid colonies generated. Solid supports, kits and apparatus for use in these methods.

L'invention concerne des procédés d'amplification et de séquençage d'au moins un acide nucléique, qui consistent à: (1) former au moins une matrice d'acide nucléique comprenant le ou les acides nucléiques à amplifier ou à séquencer, lesdits acides nucléiques contenant à l'extrémité 5' une séquence oligonucléotidique Y et à l'extrémité 3' une séquence oligonucléotidique Z, lesdits acides nucléiques comportant en outre, à l'extrémité 5', un moyen pour se fixer à un support solide; (2) mélanger cette matrice d'acide nucléique avec une ou plusieurs amorces de colonie X pouvant s'hybrider avec la séquence oligonucléotidique Z et comportant à l'extrémité 5' un moyen pour fixer les amorces de colonie à un support solide, lorsque ce dernier est présent, de sorte que les extrémités 5' aussi bien de la matrice d'acide nucléique que des amorces de colonie se lient au support solide; (3) réaliser une ou plusieurs réactions d'amplification de l'acide nucléique dans la ou les matrices liées de manière à générer les colonies d'acide nucléique et, éventuellement, réaliser au moins une étape de la détermination par séquençage d'une ou plusieurs des colonies d'acide nucléique générées. L'invention concerne en outre des supports solides, des trousses et un appareil associés auxdits procédés.

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