Methods of protein destabilization and uses thereof

Details Methods of protein destabilization and uses thereof Methods of protein destabilization and uses thereof

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/62 (2006.01) A01H 5/00 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12Q 1/37 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01)

Patent

CA 2400013

This invention is directed towards methods of destabilizing proteins in living cells, and their use for the development of novel assays. In one embodiment, the invention comprises the use of non-cleavable multimerized ubiquitin fusion proteins to destabilize a target protein, such as a reporter moiety. In one aspect of this method the constructs also comprises a linker that operatively couples the reporter moiety to the multimerized ubiquitin fusion protein. In this embodiment, enzymatic modification of the linker results in a modulation of the coupling of the reporter protein to the multimerized ubiquitin domains resulting in a change in the stability of the reporter moiety. The level of the reporter moiety in the cell can then be used as a measure of the enzymatic activity in the cell. In another embodiment the invention provides for a generalized way of coordinately regulating the cellular concentration of a plurality of target proteins. In one aspect of this method, the target proteins are operatively coupled to a ubiquitin fusion protein via linker containing a protease cleavage site. Cleavage of the linker by a protease results in uncoupling of the target protein from the multimerized ubiquitin construct, and results in an increase in the stability and concentration of the target protein.

L'invention concerne, d'une part, des procédés permettant de déstabiliser des protéines dans des cellules vivantes et, d'autre part, l'utilisation de celles-ci pour développer de nouveaux dosages biologiques. Dans un mode de réalisation, le procédé consiste à utiliser des protéines hybrides d'ubiquitine multimérisée et non clivables afin de déstabiliser une protéine cible, tel qu'un fragment rapporteur. Dans un aspect de ce procédé, la construction comprend également un lieur qui couple de manière opérationnelle le fragment rapporteur à la protéine hybride susmentionnée. Dans ce mode de réalisation, la modification enzymatique du lieur donne lieu à une modulation de la liaison entre la protéine rapporteur et les domaines de l'ubiquitine multimérisée, ce qui provoque un changement de la stabilité du fragment rapporteur. Le niveau du fragment rapporteur dans la cellule peut alors être utilisé comme mesure de l'activité enzymatique de ladite cellule. Dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne un procédé général permettant de réguler de manière coordonnée la concentration cellulaire d'une pluralité de protéines cibles. Dans un aspect de ce procédé, les protéines cibles sont couplées de manière opérationnelle à une protéine hybride d'ubiquitine par l'intermédiaire d'un lieur contenant un site de restriction de protéase. Le clivage du lieur par une protéase permet d'obtenir, d'une part, la séparation de la protéine cible de la construction d'ubiquitine multimérisée et, d'autre part, une augmentation de la stabilité et de la concentration de la protéine cible.

Affiliated with

Also associated with

Rating

Methods of protein destabilization and uses thereof does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.

If you have personal experience with Methods of protein destabilization and uses thereof, we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Methods of protein destabilization and uses thereof will most certainly appreciate the feedback.

Rate now

Comments { 0 }

Profile ID: LFCA-PAI-O-1348299