Methods of synthesizing cell-free protein

Details Methods of synthesizing cell-free protein Methods of synthesizing cell-free protein

C - Chemistry, Metallurgy

12

P

C12P 21/02 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01)

Patent

CA 2420984

A batch-type method of synthesizing a cell-free protein which is characterized by comprising, in a means of a reaction for synthesizing a cell-free protein, (1) bringing a synthetic reaction solution (a reaction phase) containing a biological extract into contact directly with a substrate and an energy source supplying solution (a supplying phase) without separating by a semi-permeable membrane, thus continuously supplying the substrate and the energy source molecules of the supplying phase into the reaction phase by free diffusion via the contact interface and, at the same time, taking off the by-products formed in the reaction phase into the supplying phase to thereby prolong the reaction time, and thus elevating the reaction efficiency; (2) pre-incubating (pre- heating) a reaction solution, containing a wheat germ extract, then diluting the synthesis reaction solution by adding a diluent solution to thereby prolong the synthetic reaction time, and thus elevating the synthesis efficiency; (3) re-supplying a substrate required in the synthesis of the protein (amino acid, ATP, GTP, creatine phosphate, etc.) and an energy source to the reaction mixture with the use of a gel filtration column or a semi- permeable membrane after ceasing the synthesis reaction and, at the same time, discontinuously taking off the by-products formed by the reaction to thereby elevate the efficiency of the reaction.

L'invention concerne une méthode de synthèse de type discontinu d'une protéine acellulaire se caractérisant en ce qu'elle consiste, dans une réaction de synthèse d'une protéine acellulaire, (1) à mettre directement en contact une solution de réaction synthétique (phase de réaction) contenant un extrait biologique avec une solution d'introduction d'un substrat et d'une source d'énergie (phase d'introduction) sans séparation par une membrane semi-perméable, introduisant ainsi de manière continue le substrat et les molécules de la source d'énergie de la phase d'introduction dans la phase de réaction par libre diffusion via l'interface de contact, et en enlevant en même temps les produits secondaires formés dans la phase de réaction dans la phase d'introduction afin de prolonger le temps de réaction et augmenter ainsi l'efficacité de la réaction ; (2) à préincuber (préchauffer) une solution de réaction contenant un extrait de germe de blé, puis à diluer la solution de réaction de synthèse en ajoutant une solution contenant un diluant afin de prolonger le temps de réaction de synthèse, et augmenter ainsi l'efficacité de synthèse ; (3) à réintroduire un substrat nécessaire dans la synthèse de la protéine (acide aminé, ATP, GTP, créatine phosphate, etc) et une source d'énergie dans le mélange de réaction à l'aide d'une colonne de gel de filtration ou d'une membrane semi-perméable à la fin de la réaction de synthèse et, en même temps, à enlever de manière discontinue les produits secondaires formés par la réaction afin d'augmenter l'efficacité de la réaction.

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