Methods of using fet labeled oligonucleotides that include a...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01) A61K 6/00 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2472554

Methods and compositions are provided for detecting a primer extension product in a reaction mixture. In the subject methods, a primer extension reaction is conducted in the presence of a polymerase having 3'.fwdarw.5' exonuclease activity and at least one FET labeled oligonucleotide probe that includes a 3'.fwdarw.5' exonuclease resistant quencher domain. Also provided are systems and kits for practicing the subject methods. The subject invention finds use in a variety of different applications, and are particularly suited for use in high fidelity PCR based reactions, including SNP detection applications, allelic variation detection applications, and the like.

L'invention concerne des procédés et des compositions destinés à détecter un produit d'extension d'amorce dans un mélange réactionnel. Dans les procédés concernés, une réaction d'extension d'amorce est menée en présence d'une polymérase possédant une activité exonucléase en 3'?5' et au moins d'une sonde oligonucléotidique marquée au moyen d'un système de transfert d'énergie de fluorescence (FET) comportant un domaine d'extinction résistant à une exonucléase à activité en 3'?5'. L'invention concerne aussi des systèmes et des kits destinés à mettre en oeuvre les procédés concernés. Cette invention trouve une utilité dans différentes applications, et elle est particulièrement bien adaptée pour être utilisée dans les réactions basées sur PCR de grande fiabilité, notamment des applications de détection de polymorphisme de nucléotide unique, des applications de détection de variation allélique et analogues.

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