C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/54 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) C12N 1/16 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01) C12P 21/08 (2006.01)
Patent
CA 2471551
The present invention relates to host cells having modified lipid-linked oligosaccharides which may be modified further by heterologous expression of a set of glycosyltransferases, sugar transporters and mannosidases to become host-strains for the production of mammalian, e.g., human therapeutic glycoproteins. The process provides an engineered host cell which can be used to express and target any desirable gene(s) involved in glycosylation. Host cells with modified lipid-linked oligosaccharides are created or selected. N- glycans made in the engineered host cells have a GlcNAcMan3GlcNAc2 core structure which may then be modified further by heterologous expression of one or more enzymes, e.g., glycosyl-transferases, sugar transporters and mannosidases, to yield human-like glycoproteins. For the production of therapeutic proteins, this method may be adapted to engineer cell lines in which any desired glycosylation structure may be obtained.
L'invention concerne des cellules hôtes contenant des oligosaccharides modifiés liés à des lipides qui peuvent subir des modifications ultérieures par l'expression hétérologue d'un ensemble de glycosyltransférases, de transporteurs de sucres et de mannosidases afin de devenir des souches hôtes pour la production de glycoprotéines thérapeutiques mammaliennes, en particulier humaines. Le procédé consiste à mettre en oeuvre une cellule hôte génétiquement modifiée pouvant être utilisée afin d'exprimer et cibler tout gène recherché impliqué dans la glycosylation. On créé ou on sélectionne des cellules hôtes contenant des oligosaccharides modifiés liés à des lipides. Les N-glycanes constitués dans les cellules hôtes génétiquement modifiées possèdent une structure principale GlcNAcMan¿3?GlcNAc¿2? qui peut alors être modifiée ultérieurement par expression hétérologue d'une ou de plusieurs enzymes, par exemple de glycosyltransférases, de transporteurs de sucres et de mannosidases, afin d'obtenir des glycoprotéines de type humain. En ce qui concerne la production de protéines thérapeutiques, ce procédé peut être adapté afin de modifier génétiquement des lignées cellulaires dans lesquelles il est possible d'obtenir une structure de glycosylation recherchée.
Davidson Robert C.
Miele Robert Gordon
Nett Juergen Hermann
Wildt Stefan
Glycofi Inc.
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1914698