C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/44 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 9/22 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2350085
A method is provided for identifying a methylated CpG containing nucleic acid including contacting a nucleic acid with a methylation sensitive restriction endonuclease that cleaves unmethylated CpG sites, contacting the sample with an isoschizomer of the methylation sensitive restriction endonuclease, wherein the isoschizomer cleaves both methylated and unmethylated CpG sites. The method also includes adding an oligonucleotide under conditions and for a time to allow ligation of the oligonucleotide to nucleic acid cleaved by the restriction endonuclease, and amplifying the nucleic acid. A method is also provided for detecting an age associated disorder including contacting a nucleic acid with a methylation sensitive restriction endonuclease that cleaves unmethylated CpG sites, contacting the sample with an isoschizomer of the methylation sensitive restriction endonuclease, wherein the isoschizomer cleaves both methylated and unmethylated CpG sites. The method also includes adding an oligonucleotide under conditions and for a time to allow ligation of the oligonucleotide to nucleic acid cleaved by the restriction endonuclease, and amplifying the nucleic acid. The amplified digested nucleic acid is adhered to a membrane, and hybridized with a probe of interest. A kit useful for detection of a CpG containing nucleic acid is also provided.
L'invention concerne une méthode d'identification d'un acide nucléique contenant un dinucléotide CpG méthylé. Cette méthode consiste à : mettre en contact un acide nucléique avec une endonucléase de restriction sensible à la méthylation, qui clive des sites CpG non méthylés ; mettre en contact l'échantillon avec un isoschisomère de l'endonucléase de restriction sensible à la méthylation, l'isoschisomère clivant à la fois les sites CpG méthylés et non méthylés ; ajouter un oligonucléotide dans les conditions et la durée nécessaires pour permettre la ligature de l'oligonucléotide à l'acide nucléique clivé par l'endonucléase de restriction ; et amplifier l'acide nucléique. L'invention concerne également une méthode de détection d'un trouble associé à l'âge, qui consiste à : mettre en contact un acide nucléique avec une endonucléase de restriction sensible à la méthylation, qui clive des sites CpG non méthylés ; mettre en contact l'échantillon avec un isoschisomère de l'endonucléase de restriction sensible à la méthylation, l'isoschimère clivant à la fois les sites CpG méthylés et non méthylés ; ajouter un oligonucléotide dans les conditions et la durée nécessaires pour permettre la ligature de l'oligonucléotide à l'acide nucléique clivé par l'endonucléase de restriction ; et amplifier l'acide nucléique. L'acide nucléique digéré et amplifié est adhéré à une membrane, et hybridé avec une sonde d'intérêt. L'invention porte enfin sur un kit qui est utile pour la détection d'un acide nucléique CpG.
Baylin Stephen
Issa Jean-Pierre
Toyota Minoru
Mbm Intellectual Property Law Llp
The Johns Hopkins University School Of Medicine
LandOfFree
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