Microbial protein expression system

Details Microbial protein expression system Microbial protein expression system

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)

Patent

CA 2370436

The present invention provides bacterial strains for secretion of soluble biologically active recombinant heterologous proteins into periplasm or on a surface/into a cultivation medium of bacteria. The invention exploits the secretion system of Gram-negative bacteria including periplasmic chaperones and usher/secretin proteins. For accomplishing the aim, the bacterial strains simultaneously express the fusion protein (signal peptide)-(mature heterologous protein)-(subunit of a bacterial surface structure, Caf1), periplasmic chaperone specific for the subunit, and outer membrane usher/secretin protein specific for the subunit. Secretion of fusion proteins: (signal peptide of Caf1)-(mature human IL-1.beta.)-(mature Caf1), (signal peptide of Caf1)-(mature human GM-CSF)-(mature Caf1), and (signal peptide of Caf1)-(mature human IL-1ra)-(mature Caf1) that were expressed in Escherichia coli simultaneously with the periplasmic chaperone CaflM and the usher/secretin protein CaflA are examples of the use of the invention.

L'invention concerne des souches bactériennes, permettant de sécréter des protéines hétérologues de recombinaison solubles biologiquement actives dans un périplasme ou sur une surface dans un milieu de culture de bactéries. Cette invention exploite le système de sécrétion des bactéries gram-négatives, comprenant des protéines chaperonnes périplasmiques et des protéines de Usher/sécrétine. Pour atteindre ledit objectif, les souches bactériennes expriment simultanément la protéine de fusion (peptide signal)-(protéine hétérologue mature)-(sous-unité de structure de surface bactérienne, Caf1), protéine chaperonne périplasmique spécifique de la sous-unité, et protéine de Usher/sécrétine à membrane extérieure spécifique de ladite sous-unité. La sécrétion de protéines de fusion (peptide signal de Caf)-( IL-1.beta. humain mature)-(Caf1 mature), (peptide signal de Caf1)-(GM-CSF humain mature)-( Caf1 mature), et (peptide signal de Caf1)-( IL-1ra humain mature)-(Caf1 mature) qui ont été exprimées dans Escherichia coli simultanément avec le Caf1M de la protéine chaperonne périplasmique et le Caf1M de la protéine de Usher/sécrétine est un exemple de l'utilisation de l'invention.

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