Microplate thermal shift assay and apparatus for ligand...

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 33/53 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C40B 30/04 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 21/71 (2006.01) G01N 33/483 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2253587

The present invention is a method for ranking the affinity of each of a multiplicity of different molecules for a target molecule which is capable of denaturing due to a thermal change. The method comprises contacting the target molecule with one molecule of the multiplicity of different molecules in each of a multiplicity of containers, simultaneously heating the multiplicity of containers, measuring in each of the containers a physical change associated with the thermal denaturation of the target molecule resulting from the heating in each of the containers, generating a thermal denaturation curve for the target molecule as a function of temperature for each of the containers and determining a midpoint temperature (T m) therefrom, comparing the T m of each of the thermal denaturation curves with the T m of a thermal denaturation curve obtained for the target molecule in the absence of any of the molecules in the multiplicity of different molecules, and ranking the affinities of the multiplicity of different molecules according to the change in T m of each of the thermal denaturation curves. The present invention also provides an assay apparatus for that includes a temperature adjusting means for simultaneously heating a plurality of samples, and a receiving means for receiving spectral emission from the samples while the samples are being heated. In further aspects of the invention, the receiving means can be configured to receive fluorescent emission, ultraviolet light, and visible light. The receiving means can be configured to receive spectral emission from the samples in a variety of ways, e.g., one sample at a time, simultaneously from more than one sample, or simultaneously from all of the samples. The temperature adjusting means can be configured with a temperature controller for changing temperature in accordance with a pre-determined profile.

Procédé permettant de classer l'affinité d'une multiplicité de molécules différentes pour une molécule cible qui est capable de se dénaturer en raison d'un changement thermique. Ledit procédé consiste à mettre en contact la molécule cible avec une molécule de la multiplicité de molécules différentes dans une multiplicité de récipients, à mesurer dans chacun des récipients un changement physique associé à la dénaturation thermique de la molécule cible résultant de la chauffe dans chacun des récipients, à établir une courbe de dénaturation thermique pour la molécule cible en fonction de la température de chacun des récipients et à déterminer à partir de cela une température médiane (Tm), à comparer la Tm de chacune des courbes de dénaturation thermique avec la Tm d'une courbe de dénaturation thermique obtenue pour la molécule cible en l'absence de toute autre molécule parmi la multiplicité de molécules différentes, et à classer les affinités de la multiplicité de molécules différentes selon le changement de Tm de chacune des courbes de dénaturation thermique. La présente invention concerne également un appareil d'analyse qui comporte un dispositif de réglage de température permettant de chauffer simultanément une pluralité d'échantillons, et un dispositif récepteur destiné à recevoir les émissions spectrales provenant des échantillons tandis qu'ils sont chauffés. Selon d'autres aspects de la présente invention, le dispositif récepteur peut être configuré pour recevoir des émissions fluorescentes, de la lumière ultraviolette et de la lumière visible. Ledit récepteur peut être configuré pour recevoir l'émission spectrale provenant d'échantillons de différentes manières, par ex. d'un échantillon à la fois, simultanément de plus d'un échantillon ou simultanément de tous les échantillons. Le dispositif de réglage de température peut être équipé d'un dispositif de régulation de température permettant de modifier la température selon un profil prédéterminé.

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