Modified promoter for rna polymerase, process for preparing...

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C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)

Patent

CA 2138871

Oligonucléotide utilisable comme brin non-matrice de promoteur, dans la transcription d'une séquence d'une cible nucléotidique, en présence d'une ARN polymérase phagique choisie parmi celles des phages dont les ARN polymérases ont des promoteurs spécifiques comprenant une séquence consensus au moins depuis la position - 17 jusqu'à la position -1, caractérisé par le fait: - qu'il comprend une séquence de coeur flanquée à l'une au moins de ses extrémités d'une séquence nucléotidique capable d'hybridation avec une séquence de la cible, - que ladite séquence de coeur est constituée par une séquence de 6 à 9 nucléotides consécutifs choisis dans la région -12 à -4 du brin non-matrice dudit promoteur spécifique, ou une séquence suffisamment homologue permettant de conserver la fonctionnalité de ladite ARN polymérase, - qu'une séquence flanquante est complémentaire d'une première région de la cible, et que l'autre séquence flanquante, lorsqu'elle est présente, est complémentaires d'une seconde région de la cible, lesdites première et seconde régions étant séparées, sur la cible, par une séquence ayant un nombre de nucléotides égal au nombre de nucléotides de la séquence de coeur, - et que le nombre de nucléotides de la région flanquante, ou la somme du nombre de nucléotides des régions flanquantes, est au moins suffisamment élevé pour que ledit oligonucléotide puisse s'hybrider avec la cible à la température d'utilisation de l'ARN polymérase. Un tel oligonucléotide permet d'initier la transcription en un site de la cible qui n'est normalement pas un site d'initiation de la transcription pour ladite ARN polymérase.

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