C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) C07K 14/50 (2006.01) C07K 14/71 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01)
Patent
CA 2168647
Monogenous preparations of conjugates of fibroblast growth factors (FGF) with cytotoxic agents are provided. Substantially all of the cytotoxic conjugates in the resulting monogenous preparation contain the same molar ratio of cytotoxic agent to polypeptide reactive with an FGF receptor. The conjugates are produced by chemical conjugation and also by expression of DNA encoding the conjugate to produce fusion proteins. The chemical conjugates are prepared by reacting FGF, which has at least one of the reactive cysteines replaced or deleted, with purified mono-derivatized saporin or with saporin that has been modified at or near one terminus by addition of a cysteine residue or replacement of a residue with cysteine. The resulting preparations are substantially monogenous. Fusion proteins are produced by expressing DNA constructs encoding muteins of an FGF in which one or more of any reactive cysteines have been deleted or replaced linked to DNA encoding a cytotoxic agent are also provided. The DNA constructs are expressed in host cells to produce monogenous preparations of cytotoxic FGF, conjugates. In embodiments in which the FGF portion of the conjugate has been modified so that there are no cysteines available for reaction, the resulting compositions are free of aggregates. The monogenous preparations of conjugates provided herein are potent cytocidal agent to cells bearing the FGF receptor.
L'invention concerne des préparations monogènes de conjugués de facteurs de croissance de fibroblastes (FGF) avec des agents cytotoxiques. Pratiquement la totalité des conjugués cytotoxiques de la préparation monogène contient le même rapport molaire agent cytotoxique/polypeptide réagissant avec un récepteur de FGF. On prépare les conjugués par conjugaison chimique et, également, par expression d'ADN codant le conjugué, de façon à produire des protéines de fusion. On prépare les conjugués par réaction de FGF, dont au moins une des cystéines réactives est remplacée ou supprimée, avec de la saporine purifiée et monodérivée ou avec de la saporine modifiée au niveau ou à proximité d'une terminaison par addition d'un résidu de cystéine ou remplacement d'un résidu avec cystéine. Les préparations obtenues sont sensiblement monogènes. On produit des protéines de fusion par expression de produits de recombinaison d'ADN codant des mutéines d'un FGF dans lequel une ou plusieurs parmi toutes les cystéines réactives ont été supprimées ou remplacées en liaison avec l'ADN codant un agent cytotoxique. Les produits de recombinaison d'ADN sont exprimés dans des cellules hôtes, afin de produire des préparations monogènes de conjugués cytotoxiques de FGF. Dans des modes de réalisation dans lesquels la partie de FGF du conjugué a été modifiée, de manière qu'aucune cystéine n'est disponible pour une réaction, les compositions obtenues sont exemptes d'agrégats. Les préparations monogènes de conjugués sont un agent cytocide efficace contre des cellules porteuses du récepteur de FGF.
Baird Andrew J.
Lappi Douglas A.
Sosnowski Barbara A.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Prizm Pharmaceuticals Inc.
Whittier Institute For Diabetes And Endocrinology (the)
LandOfFree
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