C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) G01N 33/15 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 37/00 (2006.01)
Patent
CA 2402534
The present invention relates to a method for the amplification of mRNA of a sample, comprising the steps of i.) generating cDNA from polyadenylated RNA employing at least one primer hybridizing to said polyadenylated RNA and comprising a 5' poly(C) or a 5' poly(G) flank; ii.)(aa) if present, removing non-hybridized, surplus primer(s) and/or surplus dNTPs; ii.)(ab) 3' tailing of said generated cDNA with a poly(G) tail when in step i. (a) primer(s) comprising a 5' poly(C) flank was employed or a poly(C) tail when in step i. (a) primer(s) comprising a 5' poly(G) flank was employed; or ii.)(b) 3' tailing of said generated cDNA with a poly(G) tail when in step i. (a) primer(s) comprising a 5' poly(C) flank was employed or a poly(C) tail when in step i. (a) primer(s) comprisng a 5' poly(G) flank was employed using an RNA- ligase, irrespective of the presence or absence of surplus primer(s) and/or surplus dNTPs; and iii.) amplifying the tailed cDNA with a primer hybridizing to the tail(s) generated in step ii(ab) or ii(b). Furthermore, the present invention relates to methods for the preparation of in vitro surrogate(s), for identifying expressed genes in a test sample, for identifying a drug candidate for therapy of a pathological condition and for in vitro detection of a pathological condition employing said method for amplification of mRNA. In addition, the present invention relates to the use of amplified cDNA(s) as obtained by the method of the invention in hybridization, interaction and/or enzymatic arrays.
La présente invention concerne une méthode destinée à l'amplification d'ARN messager d'un échantillon. Cette méthode consiste (i) à produire un ADN complémentaire à partir d'ARN polyadénylé au moyen d'au moins un amorceur s'hybridant à cet ARN polyadénylé et comprenant un flanc poly(C) en ou poly(G) en position 5', (ii) (aa) si nécessaire, à extraire un ou plusieurs amorceurs excédentaires non hybridés et/ou dNTP excédentaires, (ii) (ab) à pourvoir ledit ADN complémentaire d'une queue poly(G) en position 3' si dans la phase (i)(a) le ou les amorceurs comprenant un flanc poly(C) en 5' ont été utilisés, ou d'une queue poly(C) si dans la phase (i)(a) le ou les amorceurs comprenant un flanc poly(G) en 5' ont été utilisés, ou (ii)(b) à pourvoir ledit ADN complémentaire d'une queue poly(G) en 3' si dans la phase (i)(a) le ou les amorceurs comprenant un flanc poly(C) en 5' ont été utilisés, ou d'une queue poly(C) si dans la phase (i)(a) le ou les amorceurs comprenant un flanc poly(G) en 5' ont été utilisés au moyen d'une ARN-ligase, indépendamment de la présence ou de l'absence d'amorceurs excédentaires et/ou de dNTP excédentaires, et (iii) à amplifier l'ADN complémentaire à queue avec un amorceur s'hybridant aux queues produites dans la phase (ii)(ab) ou (ii)(b). En outre, la présente invention concerne des méthodes destinées à la préparation d'un ou de plusieurs substituts permettant d'identifier des gènes exprimés dans un échantillon d'essai, d'identifier un médicament candidat destiné au traitement d'un état pathologique, et de détecter un état pathologique au moyen de cette méthode d'amplification d'ARN messager. Par ailleurs, la présente invention concerne l'utilisation d'ADN complémentaires amplifiés tels qu'obtenus avec ladite méthode de l'invention dans des essais d'hybridation, des essais d'interaction et/ou des analyses enzymatiques.
Klein Christoph
Zohlnhofer Dietlind
Micromet Ag
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
Mrna amplification does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Mrna amplification, we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Mrna amplification will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1426631