C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) B01L 7/00 (2006.01)
Patent
CA 2323229
A process of amplifying a nucleic acid sequence by a procedure involving a nucleic acid charin reaction (e.g. a polymerase chain reaction or a ligase chain reaction). The process involves repeated cycles of steps including a nucleic acid denaturing step and a nucleic acid synthesis step, the synthesis step being carried out under the action of an enzyme (a nucleic acid polymerase or ligase). The denaturing step and the synthesis step are carried out in different denaturing and synthesis reaction zones, respectively, and, during the repeated cycles, the enzyme is maintained in isolation from the denaturing reaction zone, and conditions or reagents required for the denaturing step are maintained in isolation from the synthesis reaction zone to the extent that the reagents and conditions required for denaturing do not impede the synthesis reaction to a substantial extent. The use of separate zones for the steps of the reactions means that an enzyme that is destroyed or degraded by the reagents and conditions required for denaturing (e.g. a thermolabile or alkalolabile polymerase or ligase) may be used in the reaction. Moreover, the use of multiple zones means that inexpensive equipment may be used for the process. The invention includes apparatus for carrying out the process.
L'invention concerne un procédé d'amplification d'une séquence nucléotidique par un procédé faisant intervenir une réaction nucléotidique en chaîne (p. ex. une réaction en chaîne de polymérase ou de ligase). Le processus fait intervenir des cycles récurrents d'étapes qui sont les suivantes: dénaturation nucléotidique et synthèse nucléotidique, la synthèse étant effectuée sous l'action d'une enzyme (une polymérase ou ligase nucléotidique). La dénaturation et la synthèse sont effectuées dans différentes zones de réaction de dénaturation et de synthèse et, pendant les cycles récurrents, l'enzyme est maintenue isolée de la zone de réaction de dénaturation. Les conditions ou les réactifs nécessaires à la dénaturation sont maintenus isolés de la zone de réaction de synthèse dans la mesure où les réactifs et les conditions nécessaires à la dénaturation n'empêchent par que la réaction de synthèse ait lieu dans une large mesure. L'utilisation de zones séparées pour la réalisation des étapes de réaction permet l'utilisation dans la réaction d'une enzyme qui est détruite ou dégradée par les réactifs et les conditions nécessaires à la dénaturation (p. ex. une polymérase ou ligase thermolabile ou alcalilabile). En outre, l'utilisation de multiples zones permet l'emploi d'un matériel bon marché pour mettre en oeuvre ce procédé. L'invention concerne en outre un appareil permettant de mettre en oeuvre ce procédé.
Hodkinson Roger Grant
Vinayagamoorthy Thuraiayah
Hodkinson Roger Grant
Kirby Eades Gale Baker
Vinayagamoorthy Thuraiayah
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2059212