Multiple epitope fusion protein

Details Multiple epitope fusion protein Multiple epitope fusion protein

C - Chemistry, Metallurgy

07

K

C07K 19/00 (2006.01) C07K 14/005 (2006.01) C07K 14/18 (2006.01) G01N 33/531 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/569 (2006.01) G01N 33/576 (2006.01)

Patent

CA 2250723

Multiple copy epitope immunoassays are produced by: (1) identifying nucleotide sequences that encode a plurality of different epitopes; (2) placing the nucleotide sequences into an expression cassette wherein at least two copies of a sequence coding for the same epitope, preferably from different strains of a pathogen, are placed in the cassette; (3) transforming a suitable host with the cassette in order to express the sequences encoding the epitopes; (4) purifying the expressed epitopes; and (5) coating the epitopes on a surface of a substrate. The purified epitopes are encompassed by the general structural formula (A)x-(B)y-(C)z which represents a linear amino acid sequence, B is an amino acid sequence of an epitope or cluster of epitopes and each B contains at least five and not more than 1,000 amino acids, y is an integer of 2 or more, A and C are each independently an amino acid sequence of an epitope or cluster of epitopes not adjacent to B in nature and x and z are each independently an integer of 0 or more wherein at least one of x and z is 1 or more. The epitopes of the invention are more soluble than and are therefore more easily purified than conventional epitopes. Further, the presence of repeating epitope sequences (repeating at least B in the same linear amino acid sequence from different strains of a pathogen) increases the sensitivity and specificity of the assay. Repeated epitope sequences in a single linear antigen also decreases masking problems and makes it possible to include a greater number of epitopes on a unit area of substrate thereby improving sensitivity in the detection of antibodies.

Procédé de fabrication d'immuno-essais à base d'épitopes à copies multiples qui consiste à: 1) identifier les séquences nucléotidiques qui codent plusieurs épitopes différents; 2) placer les séquences nucléotidiques dans une cassette d'expression; au moins deux copies d'une séquence codant pour le même épitope, provenant de préférence de souches différentes d'un pathogène, sont placées dans la cassette; 3) transformer un hôte convenable avec la cassette pour exprimer les séquences codant les épitopes; 4) purifier les épitopes exprimés; et 5) appliquer les épitopes à la surface d'un substrat. Les épitopes purifiés répondent à la formule structurale générale (A)¿x?-(B)¿y?-(C)¿z?, qui représente une séquence linéaire d'acides aminés, où B est une séquence d'acides aminés d'un épitope ou d'un groupement d'épitopes, chaque B comprenant au minimum cinq et au maximum mille acides aminés, où y est un nombre entier égal ou supérieur à 2, où A et C sont indépendamment l'un de l'autre des séquences d'acides aminés d'un épitope ou d'un groupement d'épitopes non adjacents à B de par sa nature, et où x et z sont égaux à 1 ou plus. Les épitopes de la présente invention sont plus solubles que les épitopes conventionnels et peuvent, de ce fait, être purifiés plus facilement. De plus, la présence de séquences répétitives d'épitopes (qui répètent au moins B dans la même séquence linéaire d'acides aminés provenant de souches différentes d'un pathogène) augmente la sensibilité et la spécificité de l'essai. Ladite présence de séquences répétitives d'épitopes dans un antigène linéaire isolé facilite également le masquage et permet d'inclure un nombre plus élevé d'épitopes dans une zone unitaire d'un substrat, ce qui augmente la sensibilité en matière de détection d'anticorps.

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