Multiple gene expression for engineering novel pathways and...

A - Human Necessities – 01 – H

Patent

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A01H 5/02 (2006.01) A01H 5/10 (2006.01) A01H 13/00 (2006.01) C07K 14/325 (2006.01) C12N 1/12 (2006.01) C12N 1/20 (2006.01) C12N 5/04 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) C12N 15/17 (2006.01) C12N 15/29 (2006.01) C12N 15/31 (2006.01) C12N 15/32 (2006.01) C12N 15/52 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12N 15/82 (2006.01)

Patent

CA 2401958

Introducing blocks of foreign genes in a single operon would avoid complications such as position effect and gene silencing inherent in putting one gene at a time into random locations in the nuclear genome. Cloning several genes into a single T-DNA does not avoid the compounded variable expression problem encountered in nuclear transgenic plants. This disclosure shows that a bacterial operon can be expressed in a single integration event as opposed to multiple events requiring several years to accomplish. Expression of multiple genes via a single transformation event opens the possibility of expressing foreign pathways or pharmaceutical proteins involving multiple genes. Expressing the Cry2aA2 operon, including a putative chaperonin to aid in protein folding, in the chloroplast via a single transformation event leads to production of crystalized insecticidal proteins. Expressing the Mer operon via a single transformation event leads to a phytoremediation system.

L'introduction de blocs de gènes étrangers dans un opéron unique permet d'éviter des complications, telles qu'un effet de position et d'inactivation de gène, inhérentes à la mise en place d'un gène à la fois à des emplacements aléatoires du génome nucléaire. Le clonage de plusieurs gènes en un ADN-T unique ne permet pas d'éviter le problème d'expression variable composée qui se pose dans les plantes transgéniques nucléaires. L'invention démontre qu'un opéron bactérien peut être exprimé dans un événement d'intégration unique, par opposition à des événements multiples nécessitant plusieurs années pour se réaliser. L'expression de gènes multiples par un seul événement de transformation offre la possibilité d'exprimer des voies étrangères ou des protéines pharmaceutiques impliquant des gènes multiples. L'expression de l'opéron Cry2aA2, incluant une chaperonine généralement connue qui facilite le repliement des protéines, dans le chloroplaste par un seul événement de transformation entraîne la production de protéines insecticides cristallisées. L'expression de l'opéron Mer par un seul événement de transformation permet d'obtenir un système de phytorestauration.

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