Multiplex real-time pcr

Details Multiplex real-time pcr Multiplex real-time pcr

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C12M 1/36 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2354184

The present invention relates to a real-time Polymerase Chain Reaction (PCR) method for the detection and quantification of variants of nucleic acid sequences which differ in the probe-bindung site. The method is based on the complete or partial amplification of the same region of the variants and the addition of two or more oligonucleotide probes to the same PCR mixture, each probe being specific for the probe-binding site of at least one variant. The method can be applied e.g. to estimate the viral load in a sample, to differentiate between subgroups, subtypes isolates or clades of a viral species or to estimate the impact of the viral load on tumorigenesis.

L'invention concerne une méthode de réaction en chaîne de polymérase (PCR) en temps réel permettant de détecter et de quantifier les variants de séquences d'acide nucléique qui diffèrent par le site de liaison de la sonde. Cette méthode se fonde sur l'amplification totale ou partielle de la même région de variants, et sur l'addition d'au moins deux sondes oligonucléotidiques au même mélange de PCR, chaque sonde étant spécifique du site de liaison de la sonde d'au moins un variant. On peut utiliser cette méthode par ex. pour évaluer la charge virale dans un échantillon, pour faire la différence entre des sous-groupes, sous-types, isolats ou clades d'une espèce virale, ou pour évaluer l'impact de la charge virale sur la génèse des tumeurs.

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