C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/12 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01)
Patent
CA 2184763
The present invention is directed to mutants of the jellyfish Aequorea victoria green fluorescent protein (GFP) having at least 5 and preferably greater than 20 times the specific green fluorescence of the wild type protein. In other embodiments, the invention comprises mutant blue fluorescent proteins (BFPs) that emit an enhanced blue fluorescence. The invention also encompasses the expression of nucleic acids that encode a mutant GFP or BFP in a wide variety of engineered host cells, and the isolation of engineered proteins having increased fluorescent activity. The novel mutants of the present invention allow for a significantly more sensitive detection of fluorescence in engineered host cells than is possible with GFP or with its known mutants. Thus, the mutant fluorescent proteins provided herein can be used as sensitive reporter molecules to detect the cell and tissue-specific expression and subcellular compartmentalization of GFP or BFP mutants, or of chimeric proteins comprising GFP or BFP mutants fused to a regulatory sequence or to a second protein sequence.
La présente invention a trait à des mutants de la protéine verte fluorescente (PVF) de la méduse Aequorea victoria ayant au moins 5 et de préférence 20 fois la fluorescence verte spécifique de la protéine sauvage. Dans d'autres situations, l'invention porte sur des protéines mutantes bleues fluorescentes (PBF) qui émettent une fluorescence accrue. L'invention englobe également l'expression d'acides nucléiques qui codent une PVF ou une PBF mutante dans une grande variété de cellules-hôtes bio-manipulées et l'isolement de protéines bio-manipulées ayant une activité fluorescente accrue. Les nouveaux mutants de la présente invention permettent la détection beaucoup plus sensible de la fluorescence dans des cellules-hôtes bio-manipulées que ce qu'il est possible d'obtenir avec la PVF ou avec ses propres mutants. Ainsi, les protéines fluorescentes mutantes décrites ici peuvent être utilisées comme ligands pour détecter l'expression spécifique à la cellule et au tissu et la compartimentalisation infracellulaire des mutants de PVF et de PBF, ou de protéines chimériques comprenant des mutants de PVF et de PBF soudées à des séquences régulatrices ou à une seconde séquence protéique.
Gaitanaris George A.
Pavlakis George N.
Stauber Roland H.
Vournakis John N.
Fetherstonhaugh & Co.
The Government Of The United States Of America As Represented By
The Secretary Of The Department Of Health And Human Services
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1692782