C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/53 (2006.01) C12N 1/19 (2006.01) C12N 1/21 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12Q 1/66 (2006.01)
Patent
CA 2210354
Proteins are provided having luciferase activity with lower K m than wild-type luciferases by altering the amino acid residue at position 270 of the wild-type to an amino acid other than glutamate. Greater heat stability than wild-type luciferases while retaining the lower K m is provided by also replacing the glutamate equivalent to that at position 354 of Photinus pyralis luciferase or 356 of Luciola luciferases with an alternative amino acid, particularly lysine and/or the amino acid residue at 215 of Photinus pyralis and 217 of the Luciola species with a hydrophobic amino acid. DNA, vectors and cells that encode for and express the proteins are also provided as are test kits and reagents for carrying out luminescence assays using the proteins of the invention.
On décrit des protéines qui présentent une activité de luciférase à une Km (constante de Michaelis-Menten) inférieure à celle des luciférases de type sauvage, en remplaçant le résidu -un acide aminé- de la position 270 du type sauvage par un acide aminé autre que le glutamate. On obtient une stabilité à la chaleur supérieure à celle des luciférases de type sauvage,, tout en maintenant cette Km inférieure, en remplaçant aussi le glutamate équivalent à celui de la position 354 de la luciférase de Photinus pyralis, ou de la position 356 des luciférases de Luciola, par un autre acid aminé, et en particulier la lysine et/ou le résidu -un acide aminé- de la position 215 of Photinus pyralis et de la position 217 des espèces Luciola par un acide aminié hydrophobe. On décrit aussi de l'ADN, des vecteurs et des cellules qui codent pour ces protéines et les expriment, de même que des trousses et réactifs d'essai qui permettent d'effectuer des titrages de luminescence avec les protéines décrites.
Lowe Christopher Robin
Murray James Augustus Henry
Squirrell David James
White Peter John
Promega Corporation
Smart & Biggar
The Secretary Of State For Defence
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1475573