Mutation detection using muts and reca

Details Mutation detection using muts and reca Mutation detection using muts and reca

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01)

Patent

CA 2439098

A method for detecting mutations and polymorphisms, including single nucleotide polymorphisms (SNP's), is based on the use of RecA-like recombinase protein and a MutS-like mismatch binding protein. RecA coated, specific DNA oligonucleotide probes (RecA filaments) are used for homology searching in duplex DNA. Location of homologous sequences results in the formation of D- loop structures containing a duplex region comprised of the oligonucleotide probe and one strand of the test DNA. Mismatches or unpaired bases in the duplex region are substrates for MutS binding. Co-localization of MutS and oligonucleotide or RecA labels is diagnostic of specific sequence differences between the probe and test DNAs. Also provided are compositions and kits useful for practicing the methods of the present invention.

L'invention concerne un procédé permettant la détection de mutations et de polymorphismes d'un seul nucléotide (SNP : single nucleotide polymorphisms). Ce procédé repose sur l'utilisation de protéines de recombinase de type RecA et d'une protéine de liaison de mésappariement de type MutS. Des sondes oligonucléotidiques d'ADN spécifiques recouvertes de RecA (filaments Reca) sont utilisées pour la recherche d'homologies dans l'ADN double brin. La localisation de séquences homologues entraîne la formation de structures de boucle D contenant une région à double brin constituée de la sonde oligonucléotidique et d'un brin de l'ADN testé. Les mésappariements ou les bases non appariées de la région à double brin forment des substrats pour la liaison de MutS. Une co-localisation de MutS et de marqueurs oligonucléotidiques ou RecA indique des différences de séquence spécifiques entre la sonde et les ADN testés. L'invention concerne également des compositions et des coffrets servant à la mise en oeuvre des procédés décrits.

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