C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
P
C12P 21/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 9/10 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01)
Patent
CA 2516520
The present invention relates to eukaryotic host cells having modified oligosaccharides which may be modified further by heterologous expression of a set of glycosyltransferases, sugar transporters and mannosidases to become host~-strains for the production of mammalian, e.g., human therapeutic glycoproteins. The process provides an engineered host cell which can be used to express and target any desirable gene(s) involved in glycosylation. Host cells with modified lipid-linked oligosaccharides are created or selected. N- glycans made in the engineered host cells exhibit GnTIII activity, which produce bisected N-glycan structures and may be modified further by heterologous expression of one or more enzymes, e.g., glycosyltransferases, sugar transporters and mannosidases, to yield human-like glycoproteins. For the production of therapeutic proteins, this method may be adapted to engineer cell lines in which any desired glycosylation structure may be obtained.
L'invention concerne des cellules hôtes eucaryotes possédant des oligosaccharides modifiés pouvant être encore modifiés par l'expression hétérologue d'un ensemble de glycosyltransférases, de véhicules du sucre et de mannosidases, de manière à devenir des souches hôtes destinées à la production de glycoprotéines thérapeutiques mammifères, par exemple humaines. Le procédé permet d'obtenir une cellule hôte travaillée pouvant être utilisée pour exprimer et cibler un ou plusieurs gènes recherchés quelconques impliqués dans la glycosylation. Des cellules hôtes à oligosaccharides à liaison lipidique modifiés sont créées ou sélectionnées. Des N-glycanes conçus dans les cellules hôtes travaillées présentent l'activité GnTIII, produisant des structures de N-glycane recoupées, et peuvent être modifiés encore par l'expression hétérologue d'une ou de plusieurs enzymes, par exemple, les glycosyltransférases, véhicules du sucre et mannosidases, de manière à produire des glycoprotéines de type humain. Afin de produire des protéines thérapeutiques, le procédé peut être adapté de manière à travailler des lignées cellulaires dans lesquelles une structure de glycosylation souhaitée quelconque peut être obtenue.
Bobrowicz Piotr
Choi Byung-Kwon
Davidson Robert C.
Gerngross Tillman U.
Hamilton Stephen R.
Bobrowicz Piotr
Choi Byung-Kwon
Davidson Robert C.
Gerngross Tillman U.
Glycofi Inc.
LandOfFree
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