C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/53 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 9/04 (2006.01) C12P 19/36 (2006.01)
Patent
CA 2480639
A gene encoding an enzyme required for operation of a novel biochemical pathway for oxidation of the reduced phosphorus (P) compound phosphite was cloned from Pseudomonas and also found in other bacteria. The enzyme (designated PtxD) was overproduced in the host Escherichia coli by use of a recombinant system and purified to homogeneity via a two-step affinity protocol and characterized. The enzyme stoichiometrically produces NADH and phosphate from NAD and phosphite. Mechanistic studies indicate stereoselective transfer of hydride from phosphite to the Re-face of NAD+ with observed steady- state kinetic isotope effects of 2.1 on Vmax and 1.8 on Vmax/Km. The novel enzyme is useful for methods requiring regenerating the cofactor NADH, for use in synthetic oxidoreductases, and to synthesize chiral compounds, complex carbohydrates, and isotopically-labelled compounds.
Un gène codant une enzyme nécessaire au fonctionnement d'un nouveau mécanisme biochimique servant à l'oxydation du composé phosphore (P) réduit a été cloné à partir de <i>Pseudomonas</i>, ce gène se trouvant également dans d'autres bactéries. Cette enzyme (appelée PtxD) a été produite en excès dans l'hôte <i>Escherichia</i> coli à l'aide d'un système de recombinaison et purifiée jusqu'à un état d'homogénéité au moyen d'un protocole d'affinité en deux étapes, puis elle a été caractérisée. L'enzyme produit de manière stoechiométrique du NADH et du phosphate à partir de NAD et de phosphite. Des études mécanistes indiquent le transfert stéréosélectif de l'hybride du phosphite à la Re-face de NAD?+¿ avec des effets d'isotopes cinétiques stables observés de 2,1 sur V¿max? et de 1,8 sur V¿max?/Km. La nouvelle enzyme est utile pour des méthodes nécessitant la régénération du cofacteur NADH, destiné à être utilisé dans des oxydoréductases de synthèse et pour synthétiser des composés chiraux, des glucides complexes et des composés marqués avec des isotopes.
Garcia Costas Amaya M.
Metcalf William
Van Der Donk Wilfred A.
Vrtis Jennifer M.
White Andrea K.
The Board Of Trustees Of The University Of Illinois
Torys Llp
LandOfFree
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