C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/86 (2006.01) A61K 31/70 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/867 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)
Patent
CA 2226301
Retroviral vectors contain cis-acting viral elements for the expression, encapsidation, reverse transcription and integration of the retroviral genome nucleic acid sequence. However, said elements are not useful in the integrated provirus and may cause many problems. A retroviral vector is provided for eliminating most of the viral elements. Said vector uses, inter alia, the bacteriophage P1 Cre-lox recombination system. The 32-nucleotide loxP site is inserted into 3'LTR sequence U3 with the gene to be inserted into the cell. After loxP duplication using the LTR, the LTRs may be recombined by enzyme Cre. The structure of the resulting provirus in the host genome corresponds to a single LTR carrying a single copy of the gene to be inserted into the cell. If the Cre expression unit is inserted between the two LTRs, only single-LTR proviral structures are found following infection with the retroviral vector.
Les vecteurs rétroviraux contiennent des éléments viraux agissant en cis pour obtenir l'expression, l'encapsidation, la transcription inverse et l'intégration de la séquence d'acide nucléique du génome rétroviral. Ces éléments ne sont toutefois pas utiles dans le provirus intégré et peuvent être la cause de nombreux problèmes. L'invention concerne un vecteur rétroviral qui élimine la majorité de ces éléments viraux. Ce vecteur exploite entre autres le système de recombinaison Cre-lox du bactériophage P1. Le site loxP à 32 nucléotides est inséré à l'intérieur de la séquence U3 de la 3'LTR avec le gène à introduire dans la cellule. Suite à la duplication de loxP par l'intermédiaire de la LTR, les LTR peuvent être recombinées par l'enzyme Cre. La structure du provirus qui en résulte dans le génome hôte correspond à une seule LTR portant une copie unique du gène à introduire dans la cellule. Si l'unité d'expression de Cre est insérée entre les deux LTR, on ne trouve que des structures provirales à LTR unique à la suite d'une infection avec le vecteur rétroviral.
Choulika Andre
Nicolas Jean-Francois
Institut Pasteur
Robic
LandOfFree
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