C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/42 (2006.01) G01N 33/60 (2006.01)
Patent
CA 2374455
The present invention uses the principle that phosphomolybdate binds to hydrophobic surfaces to isolate the phos-phomolybdate complex from other phosphate-containing molecules and further uses the SPA concept to bring a radiolabeled phos-phomolybdate complex in close contact with a scintillant for measurement by scintillation counting. Generally, the present invention provides an assay for detecting and measuring the amount of orthophosphate (Pi) in an aqueous reaction mixture, wherein the amount of Pi released is separated from the reaction mixture by: adding a solution of molybdate to the reaction mixture to form a phosphomolybdate complex; and contacting the phosphomolybdate complex with a hydrophobic surface, wherein the surface is capable of being separated from the aqueous reaction mixture to allow measurement of the Pi. Particularly, this invention provides an assay for measuring the ATPase activity of enzymes, more particularly, the HPV El helicase. Image
Cette invention s'inspire du principe selon lequel le phosphomolybdate se lie à des surfaces hydrophobes, pour isoler le complexe de phosphomolybdate d'autres molécules contenant du phosphate. Par ailleurs, cette invention utilise le dosage de la scintillation par proximité pour amener un complexe de phosphomolybdate radiomarqué en contact avec un scintillant afin de procéder à des mesures par comptage par scintillation. D'une manière générale, l'invention concerne un dosage permettant de détecter et de mesurer la quantité d'orthophosphate (Pi) dans un mélange réactionnel aqueux. Pour séparer la quantité de Pi libérée du mélange réactionnel, on ajoute une solution de molybdate au mélange réactionnel afin de former un complexe de phosphomolybdate, on met ce complexe de phosphomolybdate en contact avec une surface hydrophobe qui est peut être séparée du mélange réactionnel aqueux afin de mesurer le Pi. D'une manière spécifique, l'invention concerne un dosage permettant de mesurer l'activité de l'ATPase dans des enzymes, notamment, l'hélicase E1 du HPV.
Boehringer Ingelheim (canada) Ltd.
Looper Ywe J.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1561457