C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/52 (2006.01) A61K 38/48 (2006.01) C07K 14/31 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)
Patent
CA 2206479
A method for producing the derivatives of the invention by preparing a DNA fragment comprising at least the part of the coding sequence of staphylokinase that provides for its biological activity; performing in vitro site-directed mutagenesis on the DNA fragment to replace one or more codons for wild-type amino acids by a codon for another amino acid; cloning the mutated DNA fragment in a suitable vector, transforming or transfecting a suitable host cell with the vector, and culturing the host cell under conditions suitable for expressing the DNA fragment. Preferably the DNA fragment is a 453 bp EcoRI-HindIII fragment of the plasmid pMEX602SakB, the in vitro site-directed mutagenesis is performed by an oligonucleotide-directed mutagenesis system using the plasmid pMa/c and the repair deficient E. coli strain WK6MutS, and the mutated DNA fragment is expressed E. coli strain WK6. The invention also relates to pharmaceutical compositions comprising at least one of the staphylokinase derivatives according to the invention together with a suitable excipient, for treatment of arterial thrombosis.
Méthode permettant de produire les dérivés visés par l'invention par la préparation de fragments d'ADN comportant au moins la partie de la séquence codante de la staphylokinase qui permet son activité biologique, l'exécution d'une mutagénèse in vitro dirigée sur un fragment d'ADN pour remplacer un ou plusieurs codons d'acides aminés de type sauvage par un codon ou plusieurs codons d'un autre acide aminé;le clonage du fragment d'ADN muté en un vecteur convenable , la transformation ou la transfection d'une cellule-hôte convenable avec le vecteur et culture de la cellule-hôte dans des conditions permettant l'expression du fragment d'ADN. Le fragment d'ADN sera de préférence un fragment EcoRI-Hind-III de 453 pb du plasmide pMEX602SakB, la mutagénèse in vitro dirigée est effectuée par un système de mutagénèse dirigé par un oligonucléotide faisant appel au plasmide pMa/c et la souche de E. coli incapable de réparation WK6MutS, et le fragment d'ADN muté est la souche de E. coli exprimée WK6. L'invention porte également sur des compositions pharmaceutiques contenant au moins un des dérivés de staphylokinase conforme à l'invention ainsi qu'un excipient convenable pour le traitement de la thrombose artérielle.
Collen Desire Jose
Fetherstonhaugh & Co.
Leuven Research & Development Vzw
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1684606