Noncloning technique for expressing a gene of interest

Details Noncloning technique for expressing a gene of interest Noncloning technique for expressing a gene of interest

C - Chemistry, Metallurgy

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N

C12N 15/11 (2006.01) C07K 14/02 (2006.01) C12N 5/16 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01)

Patent

CA 2325560

A noncloning method for expressing a gene of interest in a mammalian host cell is disclosed. The invention utilizes three basic individual elements: 1) a promoter element; 2) at least one gene of interest; and 3) a selectable marker cassette which includes in 5' to 3' order, an internal ribosome entry site ("IRES"), at least one gene coding for a selectable marker, and a transcription termination sequence. The three individual elements are cotransfected into a mammalian host cell where they become operably linked such that expression of the selectable marker gene(s) necessarily requires coexpression of the gene of interest.

L'invention concerne une méthode sans clonage d'expression d'un gène intéressant dans une cellule hôte mammalienne. L'invention fait appel à trois éléments individuels de base : (1) un élément promoteur ; (2) au moins un gène intéressant ; et (3) une cassette de marqueur pouvant être sélectionné et comprenant dans un ordre 5' à 3' un site intérieur d'entrée du ribosome (? IRES ?), au moins un gène codant un marqueur pouvant être sélectionné et une séquence de terminaison de transcription. Les trois éléments individuels sont cotransfectés dans une cellule hôte d'un mammalien où ils deviennent liés de manière fonctionnelle de sorte que l'expression des gènes de marqueur pouvant être sélectionné nécessite forcément une coexpression des gènes intéressants.

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