Novel 33 phage vectors

Details Novel 33 phage vectors Novel 33 phage vectors

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/63 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 7/01 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2448574

A phage genome is engineered to include a novel restriction site at one of two different positions. In a first embodiment, a restriction site is inserted into the phage genome I between the end of gene IV and the MOS hairpin which serves as a phage packaging signal for newly synthesized single strands of phage DNA. In a second embodiment, a restriction site is inserted into the phage genome after the MOS hairpin and prior to the minus strand origin. Once the phage genome is modified to contain the new restriction site, the vector can be engineered to be a "33" vector by inserting at the new restriction site a nucleotide sequence encoding at least a functional domain of pIII and at least a first cloning site for receiving a gene encoding a polypeptide to be displayed and, optionally a second cloning site for receiving a second gene encoding a polypeptide capable of dimerizing with the polypeptide to be displayed. In particularly useful embodiments, the novel vectors are engineered to produce phage particles that display antibodies.

L'invention concerne un génome de phage manipulé génétiquement afin de contenir un nouveau site de restriction sur l'une de deux positions différentes. Dans un premier mode de réalisation, un site de restriction est inséré dans le génome du phage entre l'extrémité du gène IV et le domaine d'épingle à cheveux MOS qui sert de signal d'encapsidation du phage pour des brins uniques nouvellement synthétisés d'ADN de phage. Dans un second mode de réalisation, un site de restriction est inséré dans le génome du phage après le domaine en épingle à cheveux MOS et avant l'origine de brin négatif. Après modification du génome du phage contenant alors le nouveau site de restriction, le vecteur peut être manipulé génétiquement afin de devenir un vecteur de type "33" par insertion au nouveau site de restriction d'une séquence nucléotidique codant pour au moins un domaine fonctionnel de pIII et au moins un premier site de clonage destiné à recevoir un second gène codant pour un polypeptide destiné à être présenté et, éventuellement un second site de clonage destiné à recevoir un second gène codant pour un polypeptide capable de se dimériser avec le polypeptide à présenter. Dans des modes de réalisation particulièrement utiles, les vecteurs sont manipulés génétiquement afin de produire des particules de phage présentant des anticorps.

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