C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/63 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12N 7/01 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/13 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2454837
A phage genome is engineered to include a novel restriction site at one of two different positions. In a first embodiment, a restriction site is inserted into the phage genome between the end of gene IV and the MOS hairpin which serves as a phage packaging signal for newly synthesized single strands of phage DNA. In a second embodiment, a restriction site is inserted into the phage genome after the MOS hairpin and prior to the minus strand origin. Once the phage genome is modified to contain the new restriction site, the vector can be engineered to be a "88" vector by inserting at the new restriction site a nucleotide sequence encoding at least a functional domain of pVIII and at least a first cloning site for receiving a gene encoding a polypeptide to be displayed and, optionally a second cloning site for receiving to be displayed. In particularly useful embodiments, the novel vectors are engineered to produce phage particles that display antibodies.
Cette invention permet de modifier phonétiquement un génome de phage pour qu'il contienne un nouveau site de restriction dans l'une ou l'autre de deux positions différentes. Dans un premier mode de réalisation de cette invention, un site de restriction est inséré dans le génome du phage entre l'extrémité du gène IV et la boucle en épingle à cheveux MOS qui sert de signal de conditionnement de phage pour les brins simples nouvellement synthétisés de l'ADN du phage. Dans un second mode de réalisation de cette invention, un site de restriction est inséré dans le génome du phage après la boucle en épingle à cheveux MOS et avant l'origine du brin négatif. Une fois que le génome du phage est modifié de façon à contenir le nouveau site de restriction, le vecteur peut être modifié génétiquement en vecteur <= 88 >= par insertion dans le nouveau site de restriction d'une séquence nucléotidique codant au moins un domaine fonctionnel de la protéine pVIII et au moins un premier site de clonage destiné à recevoir un gène codant un polypeptide à exprimer en surface et, éventuellement, un second site de clonage destiné à recevoir un second gène codant un polypeptide capable de dimérisation avec le polypeptide à exprimer. Dans des modes de réalisation particulièrement utiles, ces nouveaux vecteurs sont modifiés génétiquement de façon à produire des particules de phage qui expriment des anticorps.
Barbas-Frederickson Shana
Bowdish Katherine S.
Wild Martha
Alexion Pharmaceuticals Inc.
Mcfadden Fincham
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1893359