Novel enzyme

Details Novel enzyme Novel enzyme

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/53 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12Q 1/66 (2006.01)

Patent

CA 2387691

A recombinant protein having luciferase activity and at least 60 % similarity to a wild-type luciferase wherein in the sequence of the enzyme, the amino acid residue corresponding to residue 357 in Photinus pyralis luciferase is mutated as compared to the corresponding wild-type luciferase, such that the luciferase enzyme is able to emit light at a different wavelength as compared to the corresponding wild-type luciferase and/or has enhanced thermostability as compared to the corresponding wild-type luciferase. In general, the residue corresponding to 357 in Photinus pyralis luciferase is changed from an acidic amino acid to a non-acidic amino acid and preferably an uncharged polar amino acid such as tyrosine. Mutant luciferases in accordance with the invention can produce a large (50nm) wavelength shift in emitted light and have good thermostability. The resultant colour shift can be reversed by addition of coenzyme A. These properties make the mutant particularly useful in a variety of assays.

L'invention concerne une protéine recombinante possédant une activité luciférase et au moins 60 % de taux de similarité avec une luciférase de type sauvage dans laquelle, dans la séquence de l'enzyme, le résidu d'acide aminé correspondant au résidu 357 dans la luciférase <i>Photinus pyralis</i> a muté, par rapport à la luciférase de type sauvage correspondante, de manière à ce que l'enzyme de la luciférase puisse émettre de la lumière à une longueur d'onde différente par rapport à la luciférase de type sauvage et/ou renforce la thermostabilité par rapport à la luciférase de type sauvage correspondante. De manière générale, le résidu correspondant au 357 dans la luciférase Photinus pyralis se transforme de l'acide aminé acide en acide aminé non-acide et de préférence en acide aminé polaire non-chargé, comme la tyrosine. Selon la présente invention, la luciférase mutante peut produire un décalage spectral large (50nm) dans la lumière émise et posséder une bonne thermostabilité. Le décalage de couleur résultant peut être inversé en ajoutant de la coenzyme A. Ces propriétés font de l'enzyme mutante un élément particulièrement utile pour plusieurs dosages.

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