C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2326390
The present invention relates to a novel method for the identification and/or characterization of clones conferring a desired biological property from an expression library. The method of the invention comprises the step of analyzing for the expression of at least one (poly)peptide, such as a tag expressed as a fusion protein, together with a recombinant insert of a clone of said expression library, wherein the clones of said expression library are arranged in arrayed form. Said (poly)peptide may be fused N-terminally or C- terminally to said insert. The method of the invention further comprises the steps of contacting a ligand specifically interacting with a (poly)peptide expressed by the insert of a clone conferring said desired biological property with a first replica of said library of clones in arrayed form and analyzing said library of clones for the occurrence of an interaction, and/or carrying out a hybridization or an oligouncleotide fingerprint with a nucleic acid probe specific for the insert of a clone conferring said desired biological property with a second replica of said library of clones arranged in arrayed form and analyzing said library of clones for the occurrence of a specific hybridization. Finally, the method of the invention requires the identification of clones wherein an expression of the at least one (poly)peptide in step (a) and/or an interaction in step (b) and/or a hybridization or an oligonucleotide fingerprint in step (c) can be detected. The present invention also relates to a kit useful for carrying out the method of the invention.
L'invention concerne un nouveau procédé permettant l'identification et/ou la caractérisation de clones conférant une propriété biologique désirée dans une banque d'expression. Ce procédé comprend les opérations suivantes : on recherche l'expression d'au moins un (poly)peptide tel qu'un marqueur, exprimé sous forme d'une protéine hybride contenant un insert recombinant formé d'un clone de cette banque d'expression, les clones de ladite banque d'expression étant arrangés en forme de matrice. Ce (poly)peptide peut être hybridé avec cet insert au niveau de la région N-terminale ou C-terminale. Un ligand présentant une interaction spécifique avec un (poly)peptide exprimé par l'insert d'un clone conférant lesdites propriétés biologiques désirées est ensuit mis en contact avec une première réplique de cette clonothèque en forme de matrice puis on analyse cette clonothèque afin de rechercher à l'aide d'une sonde d'acide nucléique spécifique d'un insert de clone conférant les propriétés biologiques désirées, une interaction et/ou de réaliser une hybridation ou une carte peptidique d'oligonucléotide avec une seconde réplique de la clonothèque en forme de matrice, puis on analyse cette clonothèque afin de rechercher une hybridation spécifique. Finalement on identifie les clones dans lesquels on peut détecter l'expression d'au moins un (poly)peptide dans l'étape (a) et/ou une interaction dans l'étape (b) et/ou une hybridation ou une carte génomique d'oligonucléotide dans l'étape (c). L'invention concerne en outre un assortiment de matériel servant à appliquer le procédé décrit.
Bussow Konrad
Cahill Dolores
Lehrach Hans
Walter Gerald
Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.v.
Ridout & Maybee Llp
LandOfFree
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