C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/02 (2006.01) C07K 14/145 (2006.01) C12N 7/04 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01) C12N 15/863 (2006.01)
Patent
CA 2333313
This invention relates to improved methods for producing nonsegmented, negative-sense, single-stranded RNA viruses of the Order designated Mononegavirales virus, including embodiments relating to methods of producing such viruses as attenuated and/or infectious viruses, such as Measles virus (MV) and respiratory syncytial virus (RSV). One method for producing a recombinant virus from the Order Mononegavirales comprises (a) in at least one host cell, conducting transfection of a rescue composition which comprises (i) a transcription vector comprising an isolated nucleic acid molecule which comprises polynucleotide sequence encoding a genome or antigenome of a nonsegmented, negative-sense, single stranded RNA virus of the Order Mononegavirales and (ii) at least one expression vector which comprises at least one isolated nucleic acid molecule encoding the trans-acting proteins necessary for encapsidation, transcription and replication; in a host cell under conditions sufficient to permit the co-expression of these vectors and the production of the recombinant virus; (b) heating the transfected rescue composition to an effective heat shock temperature under conditions sufficient to increase the recovery of the recombinant virus; and optionally, (c) harvesting the resulting recombinant virus.
L'invention concerne des procédés améliorés pour produire des virus à ARN non segmentés, à simple brin à sens négatif, de l'ordre des Mononegavirales, qui comprennent des modes de réalisation en rapport avec des procédés de fabrication de ces virus sous la forme atténuée et/ou infectieuse, par exemple, le virus de la rougeole et le virus respiratoire syncytial. L'un des procédés de fabrication de virus à partir de l'ordre des Mononegavirales consiste en ce qui suit: (a) dans au moins une cellule hôte, effectuer la transfection d'une composition de récupération qui comprend (i) un vecteur de transcription comprenant une molécule isolée d'acide nucléique qui comporte une séquence polynucléotidique codant pour un génome ou un antigénome d'un virus à ARN non segmenté, à simple brin à sens négatif, de l'ordre des Mononegavirales et (ii) au moins un vecteur d'expression qui comprend au moins une molécule isolée d'acide nucléique codant pour les protéines à action trans, nécessaires pour l'encapsidation, la transcription et la réplication, et ce dans une cellule hôte, dans des conditions suffisantes pour permettre la co-expression de ces vecteurs et la production du virus recombinant; (b) porter la composition de récupération transfectée à une température effective de choc thermique dans des conditions suffisantes pour augmenter la récupération du virus recombinant; et éventuellement (c) récolter le virus recombinant ainsi obtenu.
Kovacs Gerald R.
Parks Christopher L.
Sidhu Mohinderjit S.
Udem Stephen A.
American Cyanamid Company
Smart & Biggar
Wyeth Holdings Corporation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1695819