C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 7/01 (2006.01) A01N 63/00 (2006.01) A61K 39/12 (2006.01) C07K 14/325 (2006.01) C12N 15/32 (2006.01) C12N 15/33 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/866 (2006.01)
Patent
CA 2327107
A recombinant baculovirus, which produces a recombinant polyhedra made up of a baculovirus polyhedrin (PH), a Bacillus thuringiensis crystal protein (CP) and jellyfish Aequorea ~ victoria green fluorescent protein (GFP), is constructed by introducing a transfer vector carrying a fusion gene encoding a fusion protein in which the PH, the CP and the GFP are directly linked from N-terminal to C-terminal, in sequence, and a wild-type baculovirus into an insect cell, simultaneously, and culturing the cell. This baculovirus transfer vector pColorBtrus is constructed by synthesizing the GFP-coding DNA fragment from plasmid pGFP, the PH gene from wild-type Autographa californica Nucleopolyhedrovirus, and aCry1Ac gene from plasmid pPN6.6 carrying a Bacillus thuringiensis Cry1Ac gene by polymerase chain reactions, and inserting first the GFP-coding DNA fragment and the PH gene in baculovirus expression vector pAcUW31 in such a way that the 5'-end of the GFP-coding DNA fragment is linked to the 3'-end of the PH gene and then, the Cry1Ac gene between the PH gene and the GFP-coding DNA fragment. The recombinant virus can kill insect pests with high pathogenicity within a short time, and is equipped with a monitoring device for infected insects, so that it can be prevented from being overused.
On construit un baculovirus de recombinaison, qui produit un polyèdre de recombinaison constitué par une polyédrine de baculovirus (PH), par une protéine cristal de Bacillus thuringiensis (CP) et par une protéine fluorescente verte de méduse Aequorea victoria (GFP), en introduisant dans une cellule d'insecte, simultanément, un vecteur de transfert portant un gène de fusion codant une protéine de fusion, dans lequel la polyédrine (PH), la protéine CP et la protéine GFP sont directement liées du N-terminal au C-terminal, en séquence, ainsi qu'un baculovirus de type sauvage, puis en cultivant cette cellule. On construit ce vecteur de transfert de baculovirus pColorBtrus, en synthétisant le fragment d'ADN codant GFP à partir du plasmide pGFP, le gène PH à partir du Nucléopolyhédrovirus Autographa californica de type sauvage, et un gène Cry1Ac à partir du plasmide pPN6.6 portant un gène Cry1Ac de Bacillus thuringiensis par réactions en chaîne de polymérase, et en introduisant d'abord le fragment d'ADN codant GFP et le gène PH dans le vecteur d'expression de baculovirus pAcUW31, pour que l'extrémité 5' du fragment d'ADN codant GFP soit liée à l'extrémité 3' du gène PH et, ensuite, le gène Cry1Ac entre le gène PH et le fragment d'ADN codant GFP. Ce virus de recombinaison peut détruire les insectes parasites avec un fort pouvoir pathogène en un temps court et il est doté d'un dispositif de surveillance pour les insectes infectés, ce qui le prémunit contre toute surutilisation.
Chang Jin Hee
Je Yeon Ho
Jin Byung Rae
Kang Soek Kwon
Park Hyun Woo
Dongbu Hannong Chemical Co. Ltd.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Je Yeon Ho
Jin Byung Rae
Kang Soek Kwon
LandOfFree
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