Novel replication competent human immunodeficiency virus...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/49 (2006.01) A01K 67/027 (2006.01) A61K 31/70 (2006.01) A61K 39/21 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C07K 14/155 (2006.01) C07K 14/16 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 7/00 (2006.01) C12N 7/04 (2006.01) C12N 15/86 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)

Patent

CA 2226860

A full-length infectious molecular clone, designated HIV-K, was obtained from a recombinant bacteriophage library constructed from HI-2PIE-infected MOLT-4/8 genomic DNA. Nucleotide sequence analysis of this clone demonstrated that the rev coding region extends for nearly 69 amino acid residues past the end of most other HIV-2/SIV rev genes. In addition, the long terminal repeat (LTR) contains a deletion of 9-10 bp, depending upon the nucleotide sequence alignment parameters, upstream from the SpI binding sites. This deletion is not present in other HIV-2/SIV isolates and is not similar to previously disclosed NFkB duplications in this region. The HIV-2KR LTR displays higher levels of basal transcriptional acitivty as compared to prototypical HIV-2 isolates. HIV-2KR is capable of infecting macaque peripheral blood lymphocytes (PBMCs) in vitro and produces a productive and persistant, albeit attenuated, infection in Macacca nemestrina. These proviral constructs are useful, inter alia, for the generation of in vitro diagnostic reagents, cell transcuction vectors, and the generation of HIV-2 based packaging cell lines.

Clone moléculaire infectieux de longueur complète appelé HIV-K, obtenu à partir d'une bibliothèque de bactériophages de recombinaison construite à partir d'ADN génomique MOLT-4/8 infecté par HI-2PIE. L'analyse de la séquence nucléotidique de ce clone a démontré que la région codante rev s'étend sur presque 69 restes d'acides aminés au-delà de l'extrémité de la plupart des autres gènes rev HIV-2/SIV. De plus, la longue répétition terminale contient une suppression de 9-10 bp, selon les paramètres d'alignement des séquences nucléotidiques, en amont des sites de liaison SpI. Cette suppression n'existe pas dans d'autres isolats HIV-2/SIV et n'est pas similaire à des duplications NFkB décrites précédemment dans cette région. La longue répétition terminale de HIV-2KR présente des niveaux élevés d'activité de transcription de base par comparaison aux isolats HIV-2 prototypes. HIV-2KR est capable d'infecter les lymphocytes du sang périphérique du macaque in vitro et produit une infection productive et persistante, quoique atténuée, chez Macacca nemestrina. Ces produits de recombinaison proviraux sont utiles, entre autres, pour la génération de réactifs de diagnostic in vitro, de vecteurs de transduction cellulaire et pour la génération de lignées cellulaires d'encapsidation basées sur HIV-2.

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