C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/68 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01)
Patent
CA 2624923
The present invention relates to a method of producing a recombinant protein comprising using a selection method other than antibiotics. In particular, it relates to a stable host/vector system based on the pyrC gene complementation designed to produce high level of heterologous recombinant protein in Escherichia coli. The expression system of the present invention allows rapid selection of plasmid containing cells during the cloning phases and lead to high protein expression during fermentation. This system has a strong selective efficiency, especially during the induction phase, leading to the selection of an almost homogeneous and stable plasmid bearing cell population. Moreover the productivity of the culture is to a large extent better than the one based on antibiotic resistance. This elevated vector stability combined with its high productivity fulfils the requirements for heterologous protein production in Escherichia coli to an industrial level.
L'invention concerne une méthode de production d'une protéine recombinante impliquant l'utilisation d'une méthode de sélection ne faisant pas appel aux antibiotiques. En particulier, l'invention concerne un système hôte/vecteur stable fondé sur la complémentarisation génique de pyrC conçue pour produire une teneur élevée en protéines recombinantes hétérologues dans Escherichia coli. Le système d'expression de l'invention permet une sélection rapide de cellules contenant des plasmides, pendant les phases de clonage et mène à une expression protéinique élevée pendant la fermentation. Ce système présente une efficacité sélective forte, en particulier pendant la phase d'induction, ce qui mène à la sélection d'une population cellulaire comportant des plasmides presque stables et homogènes. En outre, la productivité de la culture de l'invention est, dans une large mesure, supérieure à la productivité d'une culture fondée sur une résistance aux antibiotiques. Cette stabilité de vecteur élevée combinée à une haute productivité satisfait aux exigences de production protéinique hétérologue dans Escherichia coli à un niveau industriel.
Cencioni Stefano
Colagrande Antonella
D'andrea Marco Maria
Martin Franck
Rossolini Gian Maria
Dompe Pha.r.ma S.p.a.
Dompe S.p.a.
Kirby Eades Gale Baker
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1983115