Novel use of fluorescence resonance energy transfer

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 9/06 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12Q 1/00 (2006.01) C12Q 1/26 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)

Patent

CA 2592412

A novel use of Fluorescence Resonance Energy Transfer wherein a labelled protein comprising a Fluorescent energy donor label and at least one energy acceptor moiety capable of accepting energy from the donor label by Förster energy transfer is exposed to incident electromagnetic energy to excite the donor moiety and the fluorescence emission of the donor is measured. The or each energy acceptor moiety has a more and less active energy acceptor state and the level of quenching of donor fluorescence is indicative of this state. The energy acceptor moiety may be converted between its states by a redox reaction, optionally involving a partner redox protein. A novel system comprising the labelled protein, a redox partner protein, 'a light source for imposing incident light at the excitation wavelength for the fluorescent label and a light detector capable of detecting the fluorescence emitted by the label may be used in biosensors and/or to monitor enzymatic turnover.

L'invention concerne une utilisation de transfert d'énergie de résonance en fluorescence : une protéine marquée comprenant une étiquette donneur d'énergie de fluorescence et au moins une fraction acceptrice d'énergie capable d'accepter l'énergie de l'étiquette donneur par transfert d'énergie de Förster est exposée à une énergie électromagnétique incidente, permettant l'excitation de la fraction donneur. On mesure ensuite l'émission de fluorescence du donneur. La ou les fractions acceptrices d'énergie présentent un état accepteur d'énergie plus ou moins actif, et le niveau de l'absorption de la fluorescence du donneur indique cet état. La fraction acceptrice d'énergie peut être convertie entre ses états par réaction d'oxydo-réduction, faisant éventuellement intervenir une protéine d'oxydo-réduction partenaire. On peut utiliser dans les biocapteurs et/ou pour le contrôle du renouvellement enzymatique un système qui comprend la protéine marquée, une protéine d'oxydo-réduction partenaire, une source lumineuse appliquant une lumière incidente à la longueur d'onde d'excitation pour l'étiquette fluorescente et un détecteur de lumière capable de détecter la fluorescence émise par l'étiquette.

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