C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2510587
Disclosed are compositions and a method for amplification of nucleic acid sequences of interest. The method is based on strand displacement replication of the nucleic acid sequences by primers. The disclosed method is a form of multiple displacement amplification (MDA) useful for amplifying genomic nucleic acid samples and other nucleic acid samples of high complexity. The disclosed method can be used to amplify such highly complex nucleic acid samples using only one or a limited number of primers. It has been discovered that one or a small number of primers can effectively amplify whole genomes an other nucleic acid samples of high sequence complexity. The primers are specially selected or designed to be able to prime and efficiently amplify the broad range of sequences present in highly complex nucleic acid samples despite the limited amount of primer sequence represented in the primers. It has been discovered that generation of high molecular weight artifacts, in an isothermal amplification procedure, is substantially reduced or eliminated while still allowing the desired amplification of input DNA by carrying out the reaction at a higher temperature and, optionally, in the presence of one or more additives. It has also bee discovered that amplification reactions can produce amplification products of high quality, such as low amplification bias, if performed on an amount of nucleic acid at or over a threshold amount and/or on nucleic acids at or below a threshold concentration.
L'invention porte sur des compositions et sur un procédé d'amplification de séquences d'acide nucléique considérées. Ce procédé est basé sur la réplication par déplacement des brins des séquences d'acide nucléique au moyen d'amorces. Le procédé est une forme de l'amplification à déplacements multiples utile pour amplifier des échantillons génomiques de l'acide nucléique et autres échantillons d'acide nucléique de grande complexité. Le procédé de cette invention peut être utilisé pour amplifier ces échantillons d'acide nucléique extrêmement complexes au moyen d'une seule amorce ou d'un nombre limité d'amorces. Il s'avère qu'une amorce ou un petit nombre d'amorces peut effectivement amplifier la totalité des génomes et autres échantillons d'acide nucléique ayant une grande complexité de séquence. Les amorces sont notamment sélectionnées ou désignées pour pouvoir amorcer et amplifier efficacement la large plage de séquences présentes dans des échantillons d'acide nucléiques extrêmement complexes en dépit de la quantité limitée de séquences représentées dans les amorces. Il s'avère également que la génération d'artéfacts de poids moléculaire élevé, dans une procédure d'amplification isotherme, est sensiblement réduite ou éliminée, mais continue de permettre l'amplification désirée d'un ADN d'entrée en réalisant la réaction à une température plus élevée et, éventuellement, en présence d'un ou plusieurs additifs. Il s'avère aussi que les réactions d'amplification peuvent produire des produits d'amplification de haute qualité, comme une polarisation faible pendant l'amplification, si elles sont effectuées sur une quantité d'acide nucléique égale ou supérieure à un seuil et/ou sur des acides nucléiques dans une quantité égale ou inférieure à une concentration de seuil.
Alsmadi Osama A.
Bornarth Carole
Egholm Michael
Hosono Seiyu
Lasken Roger S.
Qiagen Gmbh
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1355517