C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2491984
A method for increasing the number of polynucleotides containing sequences corresponding to a mRNA species present in a sample, comprises the steps of: (i) reverse transcription of the mRNA species using a heeled 5'-amplification primer (FAP-RAND) and a heeled 3'-amplification primer (TAP-RT), wherein each primer sequence is unique, and either or each heel sequence includes a RNA polymerase promoter site, and the FAP includes a variable sequence, whereby the RNA is reverse-transcribed to produce double-stranded cDNA and then multiple cDNAs according to the variable sequence; and (ii) amplification of the cDNA using primers sufficiently complementary to the primers, i.e. FAP and TAP, within FAP-RAND and TAP-RT. In one embodiment, the method additionally comprises the step of: (iii) in vitro transcription, to produce RNA run-offs from either end of the amplicons.
La présente invention concerne une méthode permettant d'augmenter le nombre de polynucléotides contenant des séquences correspondant à une espèce d'ARNm présente dans un échantillon. Ladite méthode fait appel : (i) à la transcription par inversion de ladite espèce d'ARNm à l'aide d'une amorce d'amplification 5' <= talon >= (FAP-RAND) et d'une amorce d'amplification 3' <= talon >= (TAP-RT), chaque séquence amorce étant unique, chacune des séquences <= talon >= comprenant un site promoteur de d'ARN polymérase, la FAP comprenant une séquence variable, et l'ARN étant transcrite par inversion afin de produire de l'ADNc bicaténaire puis des ADNc multiples selon la séquence variable; et (ii) à l'amplification de l'ADNc à l'aide d'amorces suffisamment complémentaires des amorces, c'est-à-dire, la FAP et la TAP, dans la FAP-RAND et dans la TAP-RT. Dans un mode de réalisation, l'invention fait en outre appel (iii) à la transcription in vitro, afin de produire des écoulements d'ARN à partir des extrémités des amplicons.
Dixon Alastair
Skynner Michael
Cambridge Biotechnology Ltd.
Cassan Maclean
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1688969