C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/11 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/64 (2006.01) C12N 15/90 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01)
Patent
CA 2275892
Disclosed are compositions for incorporating nucleic acid into a cell. Transgene constructs that include a desired nucleic acid sequence of interest may be injected into a cell together with a protein to provide site specific or random incorporation of the nucleic acid sequence into the chromosomal DNA of the cell. The transgene construct and the protein are included in the described compositions together, with the protein facilitating the incorporation of the nucleic acid sequence of interest within the transgene construct, directly into the nucleic acid of a cell in a site-specific manner. In other embodiments, the compositions include a transgene construct and an expression construct, the expression construct including a nucleic acid sequence that encodes an enzyme capable of facilitating the incorporation of the transgene sequence of interest into a cell. The invention further includes methods for incorporating a foreign nucleic acid into a cell employing a microinjection method. In particular embodiments, the method may be employed to introduce foreign nucleic acid into cells that grow in a non-adherent state. In these applications, the cells are immobilized onto a substrate surface that includes an adherent molecule, such as fibronectin. Alternatively, the cells may be stabilized sufficiently to permit microinjection using holding pipettes or through the stimulation of the cells themselves to express molecules on their surface which bind chemical entities included at the surface of a culture plate.
L'invention concerne des compositions permettant d'incorporer de l'acide nucléique dans une cellule. Des constructions transgéniques comprenant une séquence désirée d'acide nucléique peuvent être injectées dans une cellule avec une protéine afin d'effectuer une incorporation dirigée ou aléatoire de la séquence d'acide nucléique dans l'ADN chromosomique de la cellule. La construction transgénique et la protéine sont incluses dans les compositions décrites, la protéine facilitant l'incorporation de la séquence d'acide nucléique au sein de la construction transgénique, directement dans l'acide nucléique d'une cellule de manière dirigée. Dans d'autres modes de réalisation, les compositions comportent une construction transgénique et une construction d'expression, ladite construction d'expression présentant une séquence d'acide nucléique codant une enzyme capable de faciliter l'incorporation de la séquence transgénique considérée dans une cellule. L'invention a trait aussi aux procédés visant à incorporer un acide nucléique étranger dans une cellule par micro-injection. Dans des modes particuliers de réalisation, le procédé peut être utilisé pour introduire de l'acide nucléique étranger dans des cellules qui se développent dans un état de non adhérence. Dans ce cadre, les cellules sont immobilisées sur une surface d'un substrat incluant une molécule adhérente, telle que la fribronectine. Selon une autre solution, les cellules peuvent être suffisamment stabilisées pour permettre la micro-injection au moyen de pipettes ou par stimulation des cellules elles-mêmes de sorte à exprimer des molécules sur leur surface liant les entités chimiques comprises sur la surface d'une plaque de culture.
Davis Brian
Yao Aqoing
Borden Ladner Gervais Llp
Gene-Cell Inc.
LandOfFree
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