Nucleic acid detection

Details Nucleic acid detection Nucleic acid detection

C - Chemistry, Metallurgy

12

Q

C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/04 (2006.01) C12Q 1/66 (2006.01)

Patent

CA 2322797

This invention discloses methods for detecting specific nucleic acid sequences, interrogating the identity of a specific base within a sequence, and assaying endonuclease and exonuclease activity. DNA or RNA probes are hybridized to target nucleic acid sequences. Probes that are complementary to the target sequence at each base are depolymerized, while probes which differ from the target at the interrogation position are not depolymerized. The nucleic acid detection systems utilize the pyrophosphorolysis reaction catalyzed by various polymerases to produce deoxyribonucleoside triphosphates or ribonucleside triphosphates. dNTPs are transformed to ATP by the action of NDPK. The ATP produced by these reactions is detected by luciferase or NADH based detection systems.

Cette invention a trait à des méthodes de détection de séquences nucléotidiques spécifiques, d'interrogation de l'identité d'une base spécifique dans une séquence et d'analyse d'activité endonucléase et exonucléase. On hybride des sondes d'ADN ou d'ARN à des séquences nucléotidiques. On dépolymérise les sondes complémentaires de la séquence cible à chaque base alors que l'on ne dépolymérise pas les sondes qui diffèrent de la cible à la position d'interrogation. Ces systèmes de détection d'acide nucléique font intervenir la réaction de pyrophosphorolyse catalysée par diverses polymérases afin de produire des triphosphates de désoxyribonucléoside ou de ribonucléoside. Les dNTP sont transformés en ATP sous l'action de NDPK. L'ATP produit par ces réactions est détecté grâce à la luciférase ou au moyen de systèmes axés sur la détection de NADH.

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