Nucleic acid detection and amplification by chemical linkage...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01) C07H 1/00 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01)

Patent

CA 2217325

The invention is directed towards a method of amplifying target nucleic acids by using two oligonucleotide probe complement pairs. Each member of the probe pair contains a chemical functionality group which permits linkage of the probes when the functionality groups are adjacent to one another following hybridization of the probe pairs to the template. One probe in each pair is composed of two regions, a first region which hybridizes to the target and which contains the chemical functionality group and a second, protecting region which prevents target independent joining as shown in the figure. The other probe in the pair contains the corresponding chemical functionality group. Upon joining of a first probe pair, an amplification can proceed in which the newly joined first probe pair can serve as a template for the second, complementary probe pair, which can in turn serve as a template for unjoined first probe pairs. This cyclic amplification is sensitive enough for a discriminative amplification of sequences which differ by merely a point mutation and therefore is suitable for point mutation detection and genotype determination as well as for the determination of the presence or absence of a specific nucleic acid in a sample.

L'invention se rapporte à un procédé d'amplification d'acides nucléiques cibles à l'aide de deux paires complémentaires de sondes oligonucléotidiques. Chaque élément de la paire contient un groupe de fonctionnalité chimique qui permet la liaison des sondes lorsque les groupes de fonctionnalité sont adjacents l'un par rapport à l'autre suite à l'hybridation des paires de sondes avec la matrice. Dans chaque paire, une sonde est composée de deux régions: une première région qui est hydridée avec la cible et qui contient le groupe de fonctionnalité chimique, et une seconde région de protection qui empêche les jonctions indépendantes de la cible, comme indiqué dans la figure. L'autre sonde de la paire contient le groupe de fonctionnalité chimique correspondant. Au moment de la jonction d'une première paire de sondes il peut y avoir une amplification au cours de laquelle la première paire de sondes de jonction récente tient lieu éventuellement de matrice pour la seconde paire de sondes complémentaires, qui peut à son tour faire effet de matrice pour les premières paires de sondes non jointes. Cette amplification cyclique est suffisamment sensible pour entraîner une amplification à discrimination des séquences qui se différencient simplement par une mutation ponctuelle: elle est donc appropriée à la détection des mutations ponctuelles et à la détermination des génotypes ainsi qu'à la détermination de la présence ou de l'absence d'un acide nucléique spécifique dans un échantillon.

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Profile ID: LFCA-PAI-O-1917898

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