C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2579918
The invention relates to a nucleic acid detection method involving the direct generation of a measurable signal and to the uses of same. According to the invention, the signal is generated under the action of an enzyme with 3'-5' nuclease activity and can be detected and quantified in real time. The inventive method comprises the use of fluorescently-marked oligonucleotides which are brought into contact with the nucleic acid. If one of the aforementioned oligonucleotides does not hybridise perfectly with the substrate nucleic acid, the enzyme will cut the unpaired bases, thereby releasing the marker present in the oligonucleotide and generating the measurable signal. The inventive method can be used to detect variable regions and mutations in encoding or non-encoding codons using oligonucleotides which act as DNA synthesis primers or only as hybridisation probes, and can be coupled to nucleic acid amplification systems which use thermostable or non- thermostable enzymes and to simultaneous detection systems, such as real time PCR.
L'invention concerne une méthode de détection d'acides nucléiques par génération directe d'un signal mesurable, et des utilisations de celle-ci. Le signal est généré par l'action d'une enzyme présentant une activité 3'-5' nucléase, et peut être détecté et quantifié en temps réel. Ladite méthode consiste à utiliser des oligonucléotides marqués par fluorescence, qui sont mis en contact avec l'acide nucléique. Si un de ces oligonucléotides ne s'hybride pas parfaitement avec l'acide nucléique support, l'enzyme coupera dans les bases désappariées, libérant de cette façon le marqueur présent dans l'oligonucléotide et générant le signal mesurable. La méthode de l'invention peut être mise en oeuvre pour la détection de régions variables et de mutations dans des codons codants ou non codants, pour utiliser des oligonucléotides faisant office d'amorces initiateurs de synthèse d'ADN ou uniquement de sondes d'hybridation, et peut être employée avec des systèmes d'amplification d'acides nucléiques faisant intervenir des enzymes thermostables ou pas, et avec des systèmes de détection simultanée, de type PCR en temps réel.
Calvo Macarro Francisco Javier
Franco de Sarabia Rosado Pedro Manuel
Limones Lopez Gemma Rocio
Madejon Seiz Antonio
Rodriguez Gil Sonia
Biotools Biotechnological & Medical Laboratories S.a.
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1383696