Nucleic acid isolation

Details Nucleic acid isolation Nucleic acid isolation

C - Chemistry, Metallurgy

07

H

C07H 21/00 (2006.01) B01D 15/08 (2006.01) C07H 1/06 (2006.01) C07H 1/08 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2222192

A method for aqueous phase nucleic acid isolation from a sample, comprising a step of nucleic acid adsorption on a particulate substrate, is disclosed. The method comprises an adsorption reagent preparation step (a) providing an adsorption reagent that includes a sol consisting of an aqueous continuous phase and a dispersed particulate substrate phase including a functionalised particulate polymer prepared by polymerising (1) a first water-soluble acrylamide or acrylamide derivative monomer, (2) at least one cross-linking agent and (3) at least one second water-soluble, cationic and functional monomer, said polymer having a predetermined lower critical solubility temperature (LCST) of 25-45 DEG C; a contact step (b) wherein the adsorption reagent is contacted with the sample containing the nucleic acid; an adsorption step (c) wherein, to carry out the contact step (b), at least one parameter is selected for the reaction medium, said parameters being a pH no higher than 7, an ionic strength no higher than 10<-2> M, and a temperature lower than the polymer LCST; a separation step (d) wherein the dispersed phase is separated from the continuous phase, optionally after it has been observed that adsorption has occurred; and a desorption step (e) wherein the nucleic acid is desorbed from the particulate substrate by increasing the ionic strength until an ionic strength higher than 10<-2> M is achieved.

Procédé d'isolement, en phase aqueuse, d'un matériel nucléique, présent dans un échantillon, comprenant une étape d'adsorption dudit matériel nucléique, sur un support particulaire, caractérisé en ce que: selon une étape (a) dite d'obtention du réactif d'adsorption, on dispose d'un réactif d'adsorption comprenant un sol constitué par une phase continue aqueuse et une phase discontinue du support particulaire qui comprend un polymère particulaire, fonctionnalisé, ledit polymère étant obtenu par polymérisation de (1) un premier monomère hydrosoluble, d'acrylamide ou d'un dérivé d'acrylamide, (2) au moins un agent de réticulation et (3) au moins un second monomère, fonctionnel, cationique et hydrosoluble, et ledit polymère présentant une température critique inférieure de solubilité (LCST) prédéterminée qui est comprise entre 25 et 45 °C; selon une étape (b) dite de mise en contact, on met en contact le réactif d'adsorption avec l'échantillon contenant le matériel nucléique; selon une étape (c) dite d'adsorption, pour la mise en contact selon (b), on choisit au moins un des paramètres suivants pour le milieu réactionnel: pH au plus égal à 7; force ionique au plus égale à 10 - 2M; température inférieure à la LCST du polymère; selon une étape (d) dite de séparation, après éventuellement avoir observé que l'adsorption a eu lieu, on sépare la phase discontinue de la phase continue; et selon une étape (e) dite de désorption, on dissocie, par désorption, le matériel nucléique par rapport au support particulaire, en augmentant la force ionique jusqu'à une force ionique supérieure à 10 -2M.

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