C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/48 (2006.01) C07H 19/10 (2006.01) C07H 19/20 (2006.01) C07K 16/44 (2006.01) C12Q 1/00 (2006.01) C40B 30/08 (2006.01) G01N 27/403 (2006.01)
Patent
CA 2700945
A nucleotide triphosphate (NTP) participates in a phosphorylation reaction, wherein a phosphate group is transferred from the NTP to a substrate by a kinase. Provision in a kinase reaction of a NTP whose gamma phosphate is conjugated to an electroactive label results in the transfer of the gamma phosphate-electroactive label conjugate from the NTP to the substrate. The electroactive label is an organic moiety such as a quinone or a mtrohetercycle, or is a metallocene such as a ferrocene or a cobaltocene. Upon transfer of the gamma phosphate-electroactive label conjugate to an electrode-bound substrate by a kinase, the phosphorylation event is detected electrochemically by cyclic voltammetry. Phosphorylation can also be detected by mass spectrometry of a substrate carrying the electroactive label-conjugated gamma phosphate. NTP comprising the gamma phosphate-electroactive label conjugate is used in methods of detecting the presence of a kinase in a sample, screening candidate compounds that modulate kinase activity, and in methods of diagnosing a disease associated with a kinase.
Dans cette invention, un nucléotide triphosphate (NTP) participe à une réaction de phosphorylation dans laquelle une kinase permet le transfert du groupe phosphate du NTP à un substrat. L'introduction dans une réaction par kinase d'un NTP dont le phosphate gamma est conjugué à un marqueur électroactif entraîne le transfert du conjugué phosphate gamma-marqueur électroactif du NTP au substrat. Le marqueur électroactif est une fraction organique telle qu'une quinone ou un nitrohétérocycle, ou un métallocène tel qu'un ferrocène ou un cobaltocène. Après transfert du conjugué phosphate gamma-marqueur électroactif, par kinase, à un substrat lié à une électrode, la phosphorylation est détectée électrochimiquement par voltammétrie cyclique. La phosphorylation peut également être détectée par application d'une spectrométrie de masse à un substrat portant le phosphate gamma conjugué au marqueur électroactif. Le NTP comprenant le conjugué phosphate gamma-marqueur électroactif est utilisé dans des procédés de détection de la présence d'une kinase dans un échantillon, dans des procédés de criblage de composés candidats qui modulent l'activité de la kinase ainsi que dans des méthodes servant à diagnostiquer une maladie associée à une kinase.
Kerman Kagan
Kraatz Bernie
Song Haifeng
Kerman Kagan
Kraatz Bernie
Krupnik Eduardo
Song Haifeng
University Of Western Ontario
LandOfFree
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