Oligopeptide ligation methods comprising an activated ester...

C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K

Patent

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C07K 1/107 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01)

Patent

CA 2534520

A method of ligating two or more molecules, for example, peptides to peptides or peptides to labels is provided. The method may comprise the steps: a) providing a first oligopeptide having a reactive moiety, which is a hydrazine moiety, a hydrazide moiety or an amino-óxy moiety b) providing a second oligopeptide having an activated ester moiety, c)allowing the reactive moiety of the first oligopeptide to react with the activated ester moiety of the second oligopeptide to form an oligopeptide product, in which the first and second oligopeptides are linked via a linking moiety having Formula I, II or III. The second oligopeptide may preferably be generated by thiol reagent induced cleavage of an intein fusion protein. The invention further provides labelling and ligation methods in which protein hydrazides are ligated by reaction of the hydrazide moiety with an aldehyde functionality or a ketone functionality.

L'invention concerne un procédé pour ligaturer deux molécules ou davantage, par exemple, des peptides avec des peptides ou des peptides avec des marqueurs. Le procédé selon l'invention peut comporter les étapes qui consistent : a) à fournir un premier oligopeptide comportant une fraction réactive de type hydrazine, hydrazide ou amino-oxy ; b) à fournir un deuxième oligopeptide comportant une fraction ester activée ; c) à permettre la réaction entre ladite fraction réactive du premier oligopeptide avec la fraction ester activée du deuxième oligopeptide pour former un produit oligopeptidique, le premier et le deuxième oligopeptide étant liés par l'intermédiaire d'une fraction de liaison de formule I, II ou III. Ledit deuxième oligopeptide peut de préférence être généré par le clivage d'une protéine de fusion intéine, induit par un réactif de type thiol. Cette invention se rapporte en outre à des procédés de marquage et de ligature au cours desquels des hydrazides protéiques sont ligaturés par réaction entre la fraction hydrazide et une entité aldéhyde ou une entité cétone.

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