One-step target detection assay

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – P

Patent

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Details

C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) C40B 30/00 (2006.01) C40B 30/04 (2006.01)

Patent

CA 2704487

The present invention provides nucleic acid amplification, detection, and genotyping techniques. In one embodi-ment, the present invention provides a method for amplifying and detecting a target nucleic acid sequence by providing a first primer pair comprising: a first primer comprising a target specific sequence, a tag sequence 5' of the target specific sequence, and a blocker between the target specific sequence and the tag sequence, and a second primer comprising a target specific sequence; providing a reporter attached to either the second primer or to a dNTP; providing a capture complex comprising an anti-tag sequence attached to a solid support; combining the first primer pair, the capture complex, the reporter, and a sample comprising a target nucleic acid sequence under conditions suitable for amplification of the target nucleic acid sequence and hybridization of the amplified target nucleic acid sequence to the capture complex; and detecting the amplified target nucleic acid sequence.

L'invention concerne des techniques d'amplification, de détection et de génotypage d'acide nucléique. Dans un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé d'amplification et de détection d'une séquence d'acide nucléique cible. Ce procédé consiste à : obtenir une première paire d'amorces comprenant : une première amorce comprenant une séquence cible spécifique, une séquence étiquette en 5' de la séquence cible spécifique, et un bloqueur situé entre la séquence cible spécifique et la séquence étiquette, et une seconde amorce comprenant une séquence cible spécifique; obtenir un rapporteur fixé soit sur la seconde amorce, soit sur un dNTP; obtenir un complexe de capture comprenant une séquence anti-étiquette fixée sur un support solide; combiner la première paire d'amorces, le complexe de capture, le rapporteur et un échantillon comprenant une séquence d'acide nucléique cible dans des conditions favorables permettant d'amplifier la séquence d'acide nucléique cible et d'hybrider la séquence d'acide nucléique cible amplifiée au complexe de capture; et détecter la séquence d'acide nucléique cible amplifiée.

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