Optical probes and assays

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/37 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C12Q 1/42 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 33/542 (2006.01)

Patent

CA 2370111

This invention provides an optical probe useful as an optical probe or sensor of post translational type modifications, such as phosphorylation. The invention comprises a polypeptide moiety, which contains a recognition motif for a post translational type activity, and a protease site, which is coupled to a probe moiety. Modification of the polypeptide, by the post translational type activity, results in a modulation of the rate at which a protease cleaves the polypeptide which is sensed by a measurable change in at least one optical property of the optical probe upon cleavage. The present invention also includes a recombinant nucleic acid molecule that encodes an optical probe and a vector and host cell or library of cells that include the recombinant nucleic acid molecule. The optical probe can be used in methods to determine whether a sample, including a cell or a sample from an organism, contains a post-translational type modification activity. Such methods can also be used to determine whether a test chemical modulates the activity of a modifying activity, and thus can be used to identify therapeutic compositions. The identification of such therapeutic compositions can be automated using a system that includes an optical probe.

Cette invention concerne une sonde optique qui peut être utilisée comme sonde ou capteur optique de modifications de type post-traductionnelles telles que la phosphorylation. Cette invention concerne un fragment de polypeptide qui contient un motif de reconnaissance d'une activité de type post-traductionnelle, ainsi qu'un site de protéase qui est couplé à un fragment de sonde. La modification du polypeptide, par une activité de type post-traductionnelle, se traduit par une modulation de la vitesse à laquelle une protéase clive le polypeptide, ce qui est détecté par un changement mesurable d'une propriété optique au moins de la sonde optique lors du clivage. Cette invention concerne également une molécule d'acide nucléique recombinant qui code une sonde optique, ainsi qu'un vecteur et une cellule hôte ou une bibliothèque de cellules qui contiennent la molécule d'acide nucléique recombinant. Cette sonde optique peut être utilisée dans des procédés permettant de déterminer si un échantillon, y compris une cellule ou un échantillon provenant d'un organisme, ont une activité de modification de type post-traductionnelle. Ces procédés peuvent également être utilisés afin de déterminer si un produit chimique à tester module l'activité de l'activité de modification, et peuvent ainsi servir à identifier des compositions thérapeutiques. L'identification de ces compositions thérapeutiques peut en outre être automatisée en utilisant un système qui comprend une sonde optique.

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