Optimization of cells for endogenous gene activation

Details Optimization of cells for endogenous gene activation Optimization of cells for endogenous gene activation

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/90 (2006.01) C07K 14/505 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 5/22 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/65 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/79 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2252970

The invention concerns a process for optimizing the gene expression in cells. A first aspect concerns a process for changing the expression of a nucleic acid sequence which is present endogenously in a eukaryotic cell by introduction of a heterologous expression control sequence into the genome of the cell by means of homologous recombination as well as site-specific recombinase-mediated excision of inserted foreign DNA and its replacement by further heterologous expression control sequences or/and amplification genes. In addition the invention concerns the introduction of one or several nucleic acid sequences to which an activator protein or an activator protein complex binds e.g. a hypoxia-inducible factor (HIF), into the genome of a eukaryotic cell by homologous recombination in order to change the expression of a target gene. Furthermore the invention concerns a process for testing the influence of 5' or 3' non-coding nucleic acid fragments on the expression of a target gene by determining the expression of a reporter gene. In addition the invention concerns a process for providing a DHFR-negative eukaryotic cell containing a recombinase target sequence as well as the expression of a nucleic acid sequence inserted into the recombinase target sequence.

L'invention porte sur un procédé permettant d'optimiser l'expression de gènes dans des cellules. Le premier volet concerne un procédé modifiant l'expression d'une séquence d'acides nucléiques endogène par l'introduction d'une séquence hétérologue régulant l'expression dans le génome d'une cellule eucaryote au moyen d'une recombinaison homologue, d'une excision d'un ADN étranger inséré à un site particulier à l'aide d'une recombinase et de son remplacement par d'autres séquences hétérologues régulant l'expression ou/et des gènes d'amplification. En outre, l'invention porte sur l'introduction d'une ou de plusieurs séquences d'acide nucléiques auxquelles se lie une protéine activatrice ou un complex de protéines activatrices, par exemple le HIF (hypoxia-inducible factor), dans le génome d'une cellule eucaryote par recombinaison homologue dans le but de modifier l'expression d'un gène cible. Par ailleurs, l'invention concerne aussi un procédé permettant d'évaluer les effets de la présence de fragments d'acides nucléiques 5' ou 3' non codants sur l'expression d'un gène cible par la mesure de l'expression d'un gène rapporteur. En outre, l'invention se rapporte à un procédé permettant de produire une cellule eucaryote DHFR négative contenant la séquence cible propre à une recombinase et d'exprimer une séquence d'acides nucléiques insérée dans cette séquence cible.

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