Origin of replication complex genes, proteins and methods

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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Details

C12N 15/11 (2006.01) C07K 2/00 (2006.01) C07K 14/00 (2006.01) C07K 14/39 (2006.01) C07K 14/395 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/566 (2006.01) G01N 33/94 (2006.01) A61K 38/00 (2006.01)

Patent

CA 2178965

Origin of DNA Replication Complex (ORC) genes, recombinant ORC peptides and methods of identifying DNA binding proteins and using the subject compositions are provided. Vectors and cells comprising such ORC genes find use in the production of recombinant ORC peptides. The subject ORC peptides find particular use in screening for ORC selective agents useful in the diagnosis, prognosis or treatment of disease, particularly fungal infections and neoproliferative disease. Disclosed methods for identifying a gene encoding a protein which directly or indirectly associates with a selected DNA sequence involve: transforming an expression library of hybrid proteins into a reporter strain, wherein the library comprises protein-coding sequences fused to a constitutively expressed transcription activation domain and the reporter strain comprises a reporter gene with at least one copy of a selected DNA sequence in its promoter region. Clones expressing the transcription or translation product of the reporter gene are detected and recovered.

On décrit des gènes de l'origine du complexe de réplication d'ADN (ORC), des peptides recombinés d'ORC et des procédés permettant d'identifier des protéines de liaison à l'ADN, ainsi que l'utilisation des compositions en cause. Des vecteurs et cellules qui comprennent de tels gènes d'ORC servent à produire ces peptides recombinés d'ORC qui sont particulièrement utiles dans le criblage d'agents, sélectifs pour l'ORC, qui permettent le diagnostic, le pronostic ou le traitement de maladies, notamment des infections fongiques ou des maladies néoprolifératives. Les procédés décrits permettent d'identifier un gène codant une protéine associé, directement ou non, à une séquence d'ADN déterminée, et ils consistent à transformer une banque d'expression de protéines hybrides en une souche reporter, cette banque comprenant des séquences codant des protéines, fusionnées avec un domaine d'activation de transcription exprimé de façon constitutive et la souche reporter comprend un gène reporter doté d'une copie au moins d'une séquence d'ADN sélectionnée située dans sa région promotrice. On détecte et récupère des clones qui expriment le produit de transcription ou de traduction du gène reporter.

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