C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/53 (2006.01) C12N 9/02 (2006.01) C12N 9/08 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12N 15/67 (2006.01) C12N 15/81 (2006.01) C12Q 1/26 (2006.01) C12Q 1/28 (2006.01)
Patent
CA 2328412
A method for detecting the presence of an oxygenated compound which is produced when a substrate is reacted with an oxygenase for the substrate. The method involves reacting a coupling enzyme with the oxygenated compound to form a polymeric oxygenated compound which is fluorescent or luminescent. Measurement of the fluorescence or luminescence of the polymeric oxygenated compound provides indirect detection of the oxygenated compound produced by reaction of the oxygenase with the substrate. The method is carried out in a whole cell environment wherein the cell is transformed to express both the oxygenase being screened and the coupling enzyme. The method can be used to measure the activity of monooxygenases and dioxygenases on aromatic substrates. The method is amenable to large scale screening of enzyme mutants to isolate those with maximum oxygenase activity.
L'invention concerne un procédé pour détecter la présence d'un composé oxygéné qui est produit lorsqu'un substrat est mis à réagir avec une oxygénase pour le substrat. Le procédé consiste à faire réagir une enzyme de couplage avec le composé oxygéné pour former un composé oxygéné polymère qui est fluorescent ou luminescent. La mesure de la fluorescence ou de la luminescence du composé oxygéné polymère fournit une détection indirecte du composé oxygéné produit par réaction de l'oxygénase avec le substrat. Le procédé est mis en oeuvre dans un environnement cellulaire complet, dans lequel la cellule est transformée pour exprimer à la fois l'oxygénase détectée et l'enzyme de couplage. Le procédé peut être utilisé pour mesurer l'activité de mono-oxygénases et de di-oxygénases sur des substrats aromatiques. Le procédé convient pour une détection à grande échelle de mutants enzymatiques, en vue d'isoler ceux ayant une activité oxygénase maximale.
Arnold Frances H.
Joo Hyun
Lin Zhanglin
California Institute Of Technology
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1531852