Peanut allergens and methods

Details Peanut allergens and methods Peanut allergens and methods

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/29 (2006.01) A61K 39/35 (2006.01) A61P 37/08 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C07K 14/415 (2006.01) C07K 16/16 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01)

Patent

CA 2241918

Peanuts are a common cause of food hypersensitivity reactions. The sera of 10 patients who had atopic dermatitis and a positive double-blind placebo-controlled food challenge to peanut were used to investigate the major allergens of peanut. Crude Florunner extracts were fractionated by anion-exchange chromatography using a step gradient (limit buffer, 0.05M BisTris/1.5M NaCl). A protein peak (OD 280) which eluted at 10t NaCl and demonstrated intense IgE-binding was further analyzed by two-dimensional SDS-PAGE/immunoblot analysis. The majority of this fraction is a protein which has a molecular weight of 17 kD and a pI of 5.2. Sequencing data from the N-terminus revealed the following initial 9 amino acids: (*)-Q-Q-(*)-E-L-Q-D-L. Based on IgE-binding activity and no known amino acid sequence identity to other allergens, this allergen is designated Ara h II. Ara h II may be used to detect and quantify peanut allergens in foodstuffs. Serum IgE from patients with documented peanut hypersensitivity reactions and a peanut cDNA expression library were used to identify clones that encode peanut allergens. One of the major peanut allergens, Ara h I, was selected from these clones using Ara h I specific oligo-nucleotides and polymerase chain reaction technology. The Ara h I clone identified a 2.3 kb mRNA species on a Northern blot containing peanut poly A+RNA. DNA sequence analysis of the cloned inserts revealed that the Ara h I allergen has significant homology with the vicilin seed storage protein family found in most higher plants. The isolation of the Ara h I clones allowed the synthesis of this protein in E. coli cells and subsequent recognition of this recombinant protein in immunoblot analysis using serum IgE from patients with peanut hypersensitivity.

On a fractionné des extraits bruts d'arachide de type Florunner par chromatographie par échange d'anions à gradient discontinu. On a procédé à l'analyse supplémentaire d'une crête de protéine qui a été éluée à 10 % de NaCl et a montré une forte capacité de liaison à l'immunoglobuline E (IgE) en effectuant une électrophorèse sur gel SDS ou une analyse des immunotransferts. La plus grande partie de cette fraction est une protéine qui possède un poids moléculaire égal à 17kD et un point isoélectrique (pI) de 5,2. Les données de séquencement de l'extrémité N-terminale ont révélé les 9 acides aminés initiaux suivants: (*)-Q-Q-(*)-E-L-Q-D-L. En raison de son activité de liaison à l'IgE et d'aucune homologie de séquence d'acides aminés connue avec d'autres allergènes, on a désigné cet allergène par le terme Ara h II. Ara h II peut servir à détecter et à quantifier des allergènes de l'arachide dans des produits alimentaires. On a utilisé l'immunoglobuline E du sérum provenant de patients présentant des réactions d'hypersensibilité recensées aux arachides ainsi qu'une bibliothèque d'expression d'ADNc de l'arachide dans le but d'identifier des clones codant les allergènes de l'arachide. On a sélectionné un des allergènes les plus importants de l'arachide, Ara h I, à partir de ces clones en utilisant des oligonucléotides spécifiques de l'Ara h I ainsi que des procédés d'amplification enzymatique du type PCR.

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