Peripherical tissue sample containing cells expressing the...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2690909

The present invention relates to an in vitro method for predicting a pathology related to an alteration of the mechanism of the mRNA editing of ADAR dependent A to I mRNA editing, particularly the serotonin 2C receptor (5HTR2C), in a patient from a peripherical tissue sample containing cells expressing said mRNA, such as the 5HTR2C mRNA, and/or adenosine deaminases acting on RNA (ADARs), such as skin and/or blood tissue sample. The present invention further comprises a method for identifying if an agent is capable of in vivo modifying the editing of the 5HTR2C mRNA in brain tissue or to control the efficiency of a drug intended to prevent or to treat a pathology related to an alteration of the mechanism of the 5HTR2C mRNA editing brain tissue, these methods comprising the implementation of said peripherical tissue markers. In a particular aspect, the present invention relates to such methods wherein the 5HTR2C mRNA editing rate or profile, when it is necessary, is determined by a single strand conformation polymorphism (SSCP) method after amplification by a PCR, preferably by a nested PCR, of the specific mRNA fragment containing the edition sites, making it possible, under given analytical conditions, to obtain the editing rate and/or profile of this edited 5HTR2C mRNA from said peripherical tissue. Finally the invention relates to particular nucleic acid primers implemented in said nested PCR.

La présente invention concerne une méthode in vitro de prédiction d'une pathologie liée à l'atération du mécanisme d'édition de l'ARNm par modification d'une adénosine en inosine (A-I) par les ADAR, en particulier le récepteur de la sérotonine 2C (5HTR2C), chez un patient, à partir d'un échantillon de tissu périphérique (tel qu'un échantillon de tissu, de peau et/ou de sang) contenant des cellules exprimant ledit ARNm (ARNm 5HTR2C) et/ou les adénosine désaminases agissant sur l'ARN (ADAR). L'invention concerne également une méthode permettant de déterminer si un agent peut modifier in vivo l'édition de l'ARNm 5HTR2C dans un tissu cérébral ou réguler l'efficacité d'un médicament destiné à prévenir ou à traiter une pathologie liée à une altération du mécanisme d'édition de l'ARNm dans un tissu cérébral, lesdites méthodes comprenant la mise en uvre desdits marqueurs de tissu périphérique. Dans un aspect particulier, l'invention concerne des méthodes dans lesquelles le taux ou le profil d'édition de l'ARNm 5HTR2C est déterminé, lorsque cela est nécessaire, par une technique de détection des polymorphismes de conformation monocaténaires (SSCP), après amplification par une RCP, de préférence une RCP nichée, du fragment d'ARNm spécifique contenant les sites d'édition, ce qui permet, dans certaines conditions d'analyse données, d'obtenir le taux et/ou le profil d'édition dudit ARNm 5HTR2C édité à partir dudit tissu périphérique. L'invention concerne en outre des amorces d'acide nucléique particulières mises en uvre dans ladite RCP nichée.

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