C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/70 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/74 (2006.01)
Patent
CA 2654649
The present invention relates to a cloning vector for cloning of DNA in a broad host range of bacteria, the vector being an autonomously replicating artificial chromosome comprising: (i) the RK2 origin of replication oriV; (ii) the RK2 origin of conjugate transfer oriT; (iii) par DE from RK2; (iv) a cloning region; (v) a further origin of replication which permits replication of said vector at a copy number of no more than 1 or 2; wherein the vector is no more than 15 kb in size, does not contain trfA of RK2, and is capable of cloning inserts of at least 12 kb and wherein the content of RK2 DNA in the vector is no more than 10% of RK2. The invention also relates to host cells and a vector system having the cloning vector. Methods of cloning DNA and preparing a library and uses of the vector and the RK2 replicon in metagenomic cloning are provided.
La présente invention concerne un vecteur pour le clonage de l'ADN dans un large spectre d'hôtes bactériens, ledit vecteur étant constitué d'un chromosome artificiel à réplication autonome comprenant : (i) l'origine de réplication RK2 oriV ; (ii) l'origine de transfert conjugué RK2 oriT ; (iii) le système parDE de RK2; (iv) une région de clonage; (v) une autre origine de réplication permettant la réplication dudit vecteur en un nombre de copies inférieur à 1 ou 2, la taille dudit vecteur n'excédant pas 15 kb, ledit vecteur ne contenant pas la protéine trfA de RK2 et pouvant cloner des inserts d'au moins 12 kb et l'ADN de RK2 contenu dans le vecteur n'excédant pas 10 % du RK2. L'invention concerne également des cellules-hôtes et un système vectoriel possédant le vecteur de clonage, ainsi que des procédés de clonage de l'ADN et de formation d'une bibliothèque et des utilisations du vecteur et du réplicon RK2 pour des clonages métagénomiques.
Aakvik Trine
Degnes Kristin Flogstad
Ellingsen Trond Erling
Skrede Rannveig
Valla Svein
Freedman & Associates
Sinvent As
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2080109